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急性毒性试验 －LD50 与LC50 的测定 急性毒性试验 实验目的及意义： 确定受试物的半数致死剂量LD50/LC50、观察受试物所致的急性中毒症状及其毒性作用特点，为进一步的毒性试验提供重要的参考依据。 急性毒性试验的染毒方式可有多种，包括经口、经呼吸道、经皮及注射染毒方式等。 经口急性毒性试验（LD50） 试验目的 学习急性毒性试验的实验设计原则 熟练掌握经口灌胃染毒操作技术 掌握LD50计算方法和急性毒性分级标准 试验内容 动物选择和性别鉴定 称重、编号和随机分组 小鼠经口灌胃操作技术 毒性症状观察、LD50计算和毒性分级 操作步骤 动物选择及性别辨认 急性毒性实验一般首选哺乳动物，其中又以大小鼠最为常用。大、小鼠主要依据肛门与生殖器之间的距离来区分。远——♂、近——♀。成年鼠：雄性卧位可见睾丸，雌性可见腹部有12个乳头。 动物称重、编号和随机分组 应依据统计学原则进行随机分组。 受试物剂量选择 对于一种新的化学物质，剂量选择可参照同系物的毒性或文献资料加以估计，先用少量动物以组距较大的一系列剂量进行预实验，找出粗略的致死剂量范围，然后再设计出正式实验剂量组 受试物配制 本次试验所用的受试物是80％的敌敌畏(DDVP)原液。按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同浓度的受试物溶液，而各个剂量组的动物均给予相同单位体重体积的受试化学物。 剂量mg/kg 原液量(g) 原液量(ml) 定容量(ml) 原液量 (ml) 36.44 0.1139 0.0813 50 0.0948 51.02 0.1594 0.1139 50 0.1327 71.43 0.2232 0.1594 50 0.1858 100 0.3125 0.2232 50 0.2603 140 0.4375 0.3125 50 0.3642 196 0.6125 0.4375 50 0.5099 灌胃操作 将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物的上消化道固定成一直线 毒性作用/中毒症状和动物死亡情况观察 高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观 察。观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及死亡前的特征。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。 中毒的症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、大剂量侧卧以致死亡。 改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计的方法，又称Karber法或平均致死量法。本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈20%，最高剂量组死亡率80%。 健康成年小鼠若干只（按每组5~6人，每组10只动物，♂♀各半）、50 ml容量瓶(每组1个)、加样器（200μl、1000μl）、加样枪头、DDVP原液、1 ml玻璃注射器、灌胃针头（每组2套）、棉签、染液、LD50记录纸、小鼠笼（每组2个）、电子天平（2台）、搪瓷托盘（每组一个）、受试物、苦味酸酒精饱和液、0.5%品红溶液或其它染色剂。 经呼吸道急性毒性试验（LC50） 实验目的 学习静式呼吸道染毒操作方法 学习测定和计算LC50的试验步骤和方法。 实验原理（染毒方式） 呼吸道吸入染毒可分为两种方式，一种是动式吸入，一种是静式吸入。 静式呼吸道吸入染毒： 优点：设备简单、操作方便、消耗受试物少、适用于小动物 接触易挥发液 态化合物的急性毒性研究。 缺点：受试物浓度难维持恒定，而且实验动物有经皮吸收的 可能。 动式吸入： 优点：