食品安全地方标准青奥会食品中致病菌快速检测-江苏卫生监督所.PDF

DBS 江 苏 省 地 方 标 准 DBS 32/004—2014 食品安全地方标准 青奥会食品中致病菌快速检测 2014 - 06 - 30 发布 2014 - 06 - 30 实施 江苏省卫生和计划生育委员会 发 布 DBS 32/ 004—2014 前 言 本标准系首次发布。 I DBS 32/ 004—2014 青奥会食品中致病菌快速检测 1 范围 本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157： H7、副溶血性弧菌的病原菌自动检测系统检测方法和实时荧光PCR 检测方法，以及志贺氏菌实时荧光 PCR 检测方法。 本标准适用于2014 年青奥会食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特 氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7 、副溶血性弧菌的快速检测。其他大型活动可参考本标准执行。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 第一法 病原菌自动检测系统检测 3 原理 病原菌自动检测系统利用多聚酶链反应（PCR ）扩增目标细菌DNA特异片段，筛选目标菌是否存 在。反应所需的引物、DNA聚合酶和单核苷酸等被合并成为一个稳定、干燥的试剂片，装入PCR反应 管中，检测系统运用荧光检测来分析PCR产物。PCR试剂片含有荧光染料，能结合双链DNA ，受光激发 后能发出荧光信号。在检测过程中，病原菌自动检测系统通过测量荧光信号的变化，分析测量数据，判 定阳性或阴性结果。 4 设备和材料 4.1 病原菌自动检测系统。 4.2 恒温空气振荡摇床：36℃±1 ℃、30℃±1 ℃。 4.3 加热槽：37℃±1 ℃、95℃±1 ℃。 4.4 冷却槽。 4.5 天平：感量0.1 g 。 4.6 均质器。 4.7 冰箱：4 ℃、-20 ℃。 4.8 微量移液器：1 μL-10 μL、10 μL-100 μL、100 μL-1000 μL。 1 DBS 32/ 004—2014 4.9 灭菌吸头：10 μL、200 μL、1000 μL。 4.10 PCR 反应管及支架。 4.11 pH 计或pH 试纸。 5 试剂与培养基 5.1 水：应符合GB/T 6682 中一级水的规格，121℃高压灭菌30 min 。 5.2 病原菌自动检测系统检测试剂盒 （溶菌试剂、试剂片）。 5.3 培养基 5.3.1 7.5 %氯化钠肉汤：见GB 4789.10-2010 附录A 中A.2 。 5.3.2 缓冲蛋白胨水（BPW ）：见GB 4789.4-2010 附录A 中A.1 。 5.3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC ）增菌液：见GB 4789.4-2010 附录A 中A.3 。