2018_2019学年高中生物基因工程的基本操作程序1.2.1目的基因的获取和基因表达载体的构建学案.docxVIP

1．2.1　目的基因的获取和基因表达载体的构建 [学习目标]　1.说出基因工程的基本操作程序。 2.理解获取目的基因的途径。3.说出基因表达载体的构建的目的与组成。 方式一　抑制疾病传播的转基因蚊子 巴西等拉美国家深受致倦库蚊的危害。致倦库蚊可携带多种病毒和寄生虫，能够传播脑炎、丝虫等传染病，而这些传染病常年在拉美国家肆虐。为了抑制疾病的传播，巴西科学家培育出了一种转基因雄性致倦库蚊。科学家在雄性致倦库蚊体内植入一种特殊基因，当具该基因的转基因雄蚊与野生雌蚊交配时，这种基因可以进入雌蚊的基因组，并使雌蚊死亡，从而减少了该种蚊子的数量，达到抑制疾病传播的目的。怎样才能最终得到转基因雄蚊呢？让我们一起来学习基因工程的基本操作程序吧！ 方式二　师：出示我国有知识产权的转基因抗虫棉的培育图解： 问：转基因抗虫棉的培育需要哪些步骤？ 学生看图并回答：首先要获得目的基因，其次将目的基因连接到Ti质粒上，然后将重组的Ti质粒导入受体细胞，最后要重建转基因植物。 根据学生回答补充：还需检测抗虫基因是否已经进入棉花植株，并由此引出基因工程的四部曲。 一、目的基因的获取 1．基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取。 (2)基因表达载体的构建。 (3)将目的基因导入受体细胞。 (4)目的基因的检测与鉴定。 2．目的基因的获取 (1)目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 (2)常见方法 ①从基因文库中获取 a．基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。 b．种类eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(基因组文库：包含一种生物所有的基因,部分基因文库：包含一种生物的一部分基因)) c．提取依据：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA，以及基因的表达产物蛋白质等特性。 ②利用PCR技术扩增目的基因 a．PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 b．目的：短时间内大量扩增目的基因。 c．原理：DNA双链复制。 d．前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列。 e．过程 第一步：加热至90～95 ℃，DNA解链为单链； 第二步：冷却至55～60 ℃，引物结合到互补DNA链； 第三步：加热至70～75 ℃，热稳定DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。 如此重复循环多次。 f．结果：每一次循环后，目的基因的量可以增加一倍，即成指数形式扩增(约为2n，n为扩增循环的次数)。 ③化学方法直接人工合成 a．条件：基因比较小，核苷酸序列又已知。 b．方法：借助DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 归纳总结 1.PCR技术与细胞内DNA复制的比较 比较项目 细胞内DNA复制 PCR技术 区别 解旋方式 解旋酶催化 DNA在高温下变性解旋 场所 主要在细胞核内 细胞外 酶 解旋酶、DNA聚合酶 热稳定DNA聚合酶 温度 细胞内温和条件 控制温度，需在不同温度下进行 结果 合成整个DNA分子 扩增特定的DNA片段或基因 联系 (1)模板：均需要脱氧核苷酸双链作为模板 (2)原料：均为四种脱氧核苷酸 (3)酶：均需DNA聚合酶 (4)引物：都需要引物，使DNA聚合酶从引物开始进行互补链的合成 2.获取目的基因的方法比较 方法 从基因文库获取 PCR技术扩增 化学方法直 接人工合成 基因组文库 部分基因文库 (如cDNA文库) 过程 供体细胞中的 DNA ↓限制酶 许多DNA片段 ↓连接 表达载体 ↓导入 受体菌群 ↓ 外源DNA扩增， 产生特定性状 ↓分离 目的基因 目的基因的mRNA ↓反转录 单链DNA ↓合成 双链DNA ↓插入 载体 ↓导入 受体菌群 (cDNA文库) ↓分离 目的基因 目的基因DNA ↓高温解链 单链DNA ↓与引物结合、 DNA聚合酶 大量目的基因 蛋白质的氨基酸序列 ↓推测 mRNA的核苷酸序列 ↓推测 基因的核苷酸序列 ↓化学合成 目的基因 优点 操作简单 专一性强 可在短时间内大量扩增目的基因 专一性强，可产生自然界中不存在的新基因 缺点 工作量大、盲目性大、专一性差 操作过程较繁琐，技术要求高 需要严格控制温度，技术要求高 适用范围小 3.获取目的基因的方法选择 (1)如果不知道目的基因的核苷酸序列，可以通过构建基因文库的方法，即通过受体菌储存并扩增目的基因后，从基因文库中获取目的基因。 (2)如果知道目的基因的核苷酸序列，而且基因比较小，可以通过DNA合成仪利用化学方法直接人工合成。 (3)如果知道要扩增的目的基因及两端的核苷酸序列，而且基因又比较大，可以通过PCR技术扩增目的基因。 例1　以下为形成cDNA