人脑胶质瘤中IDH1基因突变及DNA甲基化调控与干细胞相关基因表达-神经外科学专业论文.pdf.docxVIP

复旦大学博士学位毕业论文中文摘要 复旦大学博士学位毕业论文 中文摘要 脑胶质瘤是神经系统原发肿瘤中的最常见类型，随着现代医学发展及综合 治疗技术的进步，脑胶质瘤的诊断与治疗有了很大提高，德其疗效预籍并没有 明显改善，因此，积极探索胶质瘤发生发展的分子机制并在肿瘤防治上寻找新 的突破仍是当前医学研究的热点。 异柠檬酸脱氢酶l(isoeitratedehydrogenasel，IDHl)是三羧酸循环关键酶 之一，其编码基因突变在胶质瘤中发生频率很高，具有胶凄瘤特异性。IDHl 基因突变可激活细胞缺氧诱导因子la(hypoxia．inducible factor la，HIF．1a)信号 通路，可毹是脑胶质瘤发生发展的重要原因。 本谍题采用壹接测序法检测了2碡例脑基形纲脆胶糜瘤患者原发及原位复发 肿瘤样本中IDHl的突变分布，发现原发胶质瘤中1DHl基因突变发生率为54．2％， 复发胶质瘤中突变分布与原发肿瘤一致。同时检测原复发肿瘤样本中干细胞相关 基因OCT4、CDl33 mRNA、蛋白及阳性纲胞的表达水平，并根据IDHl突变分布 和病理级别进行配对分析，结果显示：IDHl突变在原发胶质瘤中可促进于细胞 相关基因表达上调；而复发胶质瘤中干细胞相关基因表达上调与IDHl突变似无 明显相关。进一步对OCT4、CDl33、IDHl的扁动子甲基化水平迸行BSP克隆测 序检测，并分析霹标基因甲基化水平与基因表达的相关性，结果提示；Ⅸ唾A低 甲基化可上调OCT4、CDl33基因表达，可能是复发胶质瘤中干细胞相关基因表 达上调的主要原因之一，且部分参与了原发胶质瘤的发生过程；而IDHl启动子 在原复发胶质瘤孛均没有发生明显Ⅸ妊甲基化。 本课题初步证明了人脑胶质瘤中IDHl基因突变可促进干细胞相关基因的表 达，可能是原发胶质瘤发生的重要机制之一，而七yNA低甲基化可上调干细胞相 关基因表达，在胶质瘤发生、复发过程中阉样也发挥着重要的调控作矮。这为迸 一步理解胶质瘤的发生机制与探索嗡床治疗薪方向提供了部分实验基础。 关键词：胶质瘤；IDHl；OCT4；CDl33；突变；DNA基化；复发 【中图分类号1 R739．41 复旦大学博士学位毕业论文第一部分 复旦大学博士学位毕业论文 第一部分 人撇瘤中IDHl基因突变与干细胞相关基因表达 中文搐要 墨的：(1)研究胶璜瘤中异柠檬骏脱氢酶l(删)基因突变分布情况；(2)分 析原发性胶质瘤中千细胞相关基因OCT4、 CDl33表达改变与IDHl突变的相 关性。(3)配对分析复发胶质瘤中OCT4、 CDl33基因表达变化及与IDHl突 变的相关性。(4)初步探讨Z翻犍—伐ⅨG一凌F．1伐通路与干细胞相关基因表达改 变的关系。为阐明胶质瘤中IDHl突变对于细胞样细胞的影响及作用机制进行初 步实验研究。 方法：(1)运用直接测序法检测24例原发胶质瘤及相应原位复发肿瘤中IDHl 突变分布。(2)运用免疫组化技术检测24例原发胶质瘤及相应原位复发肿瘤组 织中OCT4和CDl33阳性细胞≥艺倒。(3)通过实时定量RT-PCR技术和Western blot方法在胶质瘤冰冻样本中验证OCT4、CDl33基因mRNA和蛋白表达。(4) 对胶质瘤细胞株U87MG、u25 1MG使用Oxalomalate进行处理后，采用实时定 量RT-PCR技术和Westem Blot法分舅|j检测细胞株中OCT4、CDl33基因mRNA 和蛋白的表达水平。 结果：(1)在24例原发星形细胞胶质瘤样本中通过基因测序检测IDHI，共检测 鹫13铡患者发生IDHl突变，突变类型均为R132H，突变发生率与胶凄瘤瘸理 级别负相关(，一0．096)；复发肿瘤中突变分布与原发肿瘤一致，无新发突变。 (2)全部患者的原发胶质瘤中均检测到OCT4阳性细胞，阳性细胞比例随肿瘤 恶性程度升高藤上调(r=O．907)；24镛患者原发胶质癌样本中2l例检灏到CDl33 阳性细胞(87．5％)， 阳性细胞比例与病理级别正相关(r锄。859)。按照相同病 理级别配对IDHl突变组与野生组，原发胶质瘸中突变组OCT4和CDl33阳性 细胞比饼较野生组升高，有统计学差异(p，o。05)，与实时定量RT-PCR技术和 Western blot法检测结果相符。(3)配对比较原发、复发胶质瘸，复发胶矮瘤 OCT4阳性细胞数较原发肿瘤增加(t=-8．182，P0．05)，CDl33阳性细胞数也较 原发肿瘤增加(户3．797，PO．05)，与实时定量RT-PCR技术和Westem blot法检 复旦大学博士学位毕业论文测结果相符，但IDHl突变组与野生组间并无明显统计学差异。(4)胶质瘤细胞 复旦大学博士学位毕业论文 测结果相符，但IDHl突变组与野生组