流式细胞术在肿瘤学中应用.pptVIP

回输后的监测 谢谢！ 　　根据产生的细胞因子的类型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2 Ｔｈ1细胞产生ＩＬ 2、ＩＬ 12、ＩＦＮ γ、ＴＮＦ β等细胞因子,主要参与细胞介导的免疫反应、迟发性过敏反应,并在清除病毒等细胞内致病因子方面起着重要作用 Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ 4、ＩＬ 5、ＩＬ 6、ＩＬ 10、ＩＬ 13等细胞因子,主要促进体液免疫反应,中和胞外病原体 相应地，CD8+T细胞也可以分为Tc1和Tc2 * * * * * * * * * * * * 流式细胞术在肿瘤学中的应用 内容 流式细胞仪概念、原理及应用 流式细胞术优势 流式细胞术在肿瘤学中的应用 　　流式细胞术（Flow Cytometry）是利用流式细胞仪检测细胞或其它颗粒性物质的物理、化学特性。同时利用荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术的发展,大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段。 流式细胞术 流式细胞仪检测流程 流式细胞术优势（分析型） 高速测定细胞，大样本计数 检测稀有细胞 多参数分析 FC500 流式细胞仪 流式细胞术的应用 检测特性：大小、颗粒度 、细胞受体/分子、核酸 (DNA/RNA)、蛋白…… 肿瘤学中的应用 肿瘤免疫 肿瘤细胞周期和凋亡 肿瘤干细胞的研究 血液中循环肿瘤细胞的研究 肿瘤免疫学 天然免疫 中性粒细胞 嗜酸性细胞 嗜碱性细胞 单核细胞 / 巨噬细胞 树突细胞: mDC - pDC NK 细胞 NKT 细胞 ?? T 淋巴细胞 CD5+ B 细胞 获得性免疫 B细胞 辅助性T细胞 Th1 Th2 细胞毒T细胞 调节性T细胞 淋巴细胞免疫分型 T细胞： CD3+ CD4+ (Th，Treg) CD8+ (Tc) B细胞： CD19+ NK细胞：CD3- CD56+ 肿瘤细胞免疫特点 CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 NK CIK 正常 正常 正常 正常 正常 正常 正常 正常 正常 正常 正常 Th1Th2细胞因子分泌细胞测定 Th1细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。 Th2细胞 ：介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化，是IgG1和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。 Th1/Th2漂移与肿瘤免疫 肿瘤可使Th1/Th2平衡向Th2偏移,而Th1/Th2偏移又会促进肿瘤的发展,故探讨Th1/Th2功能状况以判断肿瘤患者的免疫状态可为肿瘤生物治疗提供有效的理论依据。 CD4+CD25+调节性T细胞 调节性T细胞具有免疫抑制功能，在多种免疫性疾病中起重要的调节作用，成为近年来免疫学领域研究的重要内容。 许多研究表明：在实体肿瘤和血液恶性肿瘤患者中Treg数目增多。 在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多种实体肿瘤患者外周血和肿瘤局部微环境中,Treg比例增高,且数目与患者肿瘤进展程度和预后、生存率呈负相关。 血液恶性肿瘤患者中Treg数目呈肿瘤发展阶段相关性增长。但是,Treg增高的机制尚不清楚。 去除Treg或封闭其抑制功能，可以增强抗肿瘤免疫反应。 化疗作为一种重要的治疗肿瘤的方法,对肿瘤患者外周血中的Treg数目可产生一定影响。 化疗药物可能通过抑制肿瘤微环境中血管生成,促进Treg凋亡,从而起到有效控制肿瘤的作用。 但也有报道证明肿瘤患者接受化疗后,外周血中Treg数目增多。 化疗究竟对Treg会产生怎样的影响,目前尚无定论,有待于进一步研究。 因此,Treg在肿瘤治疗方面的应用成为研究的热点。如何清除或逆转Treg的抑制作用是肿瘤免疫治疗的一个关键问题。 树突状细胞 (DC) DC控制体内免疫和耐受的平衡 控制T,B 细胞对可溶性抗原的反应 影响产生免疫球蛋白的分类 DC 亚群 分为MDC 和PDC MDC诱导免疫应答 PDC诱导免疫耐受 树突状细胞流式分析 阴性表达抗原设门 Lin (CD3,14,19,20,56)/HLADR组合 DC: Lin-/HLADR+ DC亚群分析 骨髓DC: CD11c+ 外周血DC: CD12