干扰素-α2a对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶表达影响的实验分析-外科学专业论文.docxVIP

中文摘要广州医学院硕士学位论文 中文摘要 广州医学院硕士学位论文 PAGE PAGE 2 干扰素–α2a 对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶表达影响的实验研究 中文摘要 研究背景 胸苷磷酸化酶(thymidine phsphorylase，TP﹚是一种核苷代谢酶，由 45kDa 大小的亚单位构成的同型二聚体，已证实它与 PD-ECGF 为同一种物质， 在体内具有显著的血管生成作用，体外却没有有丝分裂活性即细胞增殖功能，它 对维持 DNA 复制和修复所需要的 dNTP 库的稳态有重要作用。此外，TP 还有抗 细胞凋亡作用，由于在正常人体组织中 TP 表达极低，肿瘤组织中的 TP 过度表 达与促进肿瘤发生相关联。它在人类癌组织中有选择性的高表达，有关核苷代谢 酶的研究发现大部分人类癌组织中 TP 表达常有增加，其表达具有肿瘤依赖性， 且与其他的核苷代谢酶如胸苷酸合成酶相伴存在。TP 在组织内催化 5-脱氧-5-氟 尿苷(5-deoxy-5-fluomuridine，5-DFUR)为 5-氟尿嘧啶(5- fluorouracil，5-FU)而 发挥选择性细胞抑制作用，即它是 5-FU 的前体药物氟铁龙和卡培他滨 （capecitabine，商品名为希罗达）的代谢限速酶，二者均转化为 5-FU，抑制 DNA 合成，发挥抗肿瘤作用。多种细胞因子如肿瘤坏死因子α（tumour necrosis factor ， TNFα）、白介素 1（interleukin 1）及 IFN 等能够上调肿瘤细胞中 TP 表达， 缺氧和低血糖条件下也能促进其表达，表明炎症或微环境变化的刺激可以诱导其 表达。氟尿嘧啶及其衍生物等 TP 靶向治疗药物的出现使得与 TP 相关的肿瘤治 疗显得尤为特殊，临床研究发现诱导 TP 表达治疗与 5-DFUR 相关的 TP 靶向化 疗具有协同抗肿瘤的作用，提高总体疗效，在化疗有效率、疾病进展时间及转移 癌患者生存率方面均有良好效果。本研究拟探讨 IFN‐α2a 对人结肠癌细胞 TP 表达水平的影响，从而为临床联合应用 IFN‐α2a 与 5–Fu 的前体药物 5-DFUR 和卡培他滨等治疗结肠癌提供实验依据。TP 靶向治疗的出现及其生物学功能的 分析，这些治疗理念将可能成为一种特异性的化疗方法。 目的 探讨 IFN‐α2a 对人结肠癌细胞中胸苷磷酸化酶表达水平的影响。 方法 采用 MTT 法检测 IFN-α2a 对结肠癌 Lovo 和 SW480 细胞体外生长情况 的影响，及其分别联合应用 5-FU、5-DFUR 对两株细胞系毒性作用的比较；应 用不同浓度的 IFN-α2a 分别处理 Lovo 和 SW480 细胞，Trizol 法提取各细胞 Total RNA，采用荧光定量 PCR 法检测各处理组细胞 TPmRNA 表达水平的差异。 结果 1、不同浓度 IFN‐α2a 处理 Lovo 和 SW480 细胞，对照组（IFN‐α 2a0U/ml）及实验组（IFN‐α2a 按等倍梯度稀释依次为 320～1.25U/ml）间结肠 癌细胞存活率变化不显著，组间差异无统计学意义（P＞0.05）；联合应用 IFN‐ α2a 前后，5-FU 对 Lovo 和 SW480 癌细胞的毒性作用，即 5-FU 的 IC50 值均无 明显变化，差异无统计学意义（P0.05）；5-DFUR 对两株结肠癌细胞的毒性作 用，即其 IC50 值均有所降低、并有统计学意义（P0.05）。 2、IFN-α2a 可上调 Lovo 和 SW480 细胞中 TP 表达水平。与对照组（IFN- α2a 浓度为 0U/ml）相比，IFN-α2a 浓度为 50U/ml 时对两细胞系 TP 表达水平 的影响均无统计学意义（P0.05）；500U/ml 及 5000U/ml 的 IFN-α2a 均上调 Lovo 细胞 TP 表达水平，且有统计学意义（ P≤0.01）；500U/ml 的 IFN-α2a 对 SW480 细胞 TP 表达的影响无统计学意义（ P0.05），而 5000U/ml 的 IFN-α2a 则上调其 TP 表达水平，并有统计学意义（ P=0.009）；各细胞系内实验组间 TP 表达水平差 异均无统计学意义（P0.05）。 结论 1、体外单用 IFN‐α2a 对结肠癌细胞无明显抑制作用，联合使用 IFN‐ α2a 并不能增强 5-FU 对结肠癌细胞的毒性作用，而可以协助提高 5-DFUR 对 结肠癌细胞的毒性和抑制作用。 2、TP 在结肠癌细胞 Lovo 和 SW480 中均有表达，IFN‐α2a 对两株细胞 系 TPmRNA 表达水平均有上调作用，并呈剂量依赖性，即 IFN‐α2a 达到一定 剂量方可对其产生调节作用；而达到这一作用剂量范围之后，IF