第7章病入毒教案-0510-04.docVIP

PAGE PAGE 5 第 6 章 病 毒 概 述 一、病毒的发现和研究历史 1886年，Mayer 发现具有传染性的烟草花叶病（植物）； 1892年，Ivanovsky发现烟草花叶病病原体能通过细菌滤器：一种能通过细菌滤器的“细菌毒素”或极小的细菌； 1898年，Beijerinck对烟草花叶病病原体的研究结果： 能通过细菌滤器； 可被乙醇沉淀而不失去其感染性， 能在琼脂凝胶中扩散； 用培养细菌的方法不能被培养出来，推测只能在植物活细胞中生活；→ 比细菌小的具有传染性的活的流质（contagium vivum fluidum） 1900年前后，包括口蹄疫（foot and mouth disease）在内的多种动物疾病病原体的滤过性特性被证明（动物）。→filterable viruses（滤过性病毒） Twort（1915年）、Herelle（1917年），分别发现细菌（Shigella dysenteriae）病毒（细菌） Bacteriophages→ Phago：→“to eat” 噬菌体（phage） 1935年，Stanley首次提纯并结晶了烟草花叶病毒； 1935年，Bawden等证明烟草花叶病毒的本质为核蛋白； 1940年，Kausche首先用电镜观察到烟草花叶病毒颗粒。 病毒学（virulogy） ： 研究病毒（virus）的本质及其与宿主的相互作用的科学，是微生物学的重要分支学科。 理论上：极大地丰富了现代生物学（微生物学、分子生物学、分子遗传学）的理论与技术； 有效地控制和消灭人及有益生物的病毒病害； 实践上：利用病毒对有害生物、特别是害虫进行生物防治；发展以基因工程为中心的生物高新技术产业。 二、病毒的特点和定义 特点 1）不具有细胞结构，具有一般化学大分子的特征。 2）一种病毒的毒粒内只含有一种核酸，DNA或者RNA。 3）大部分病毒没有酶或酶系极不完全，不含催化能量代谢的酶，不能进行独立的代谢作用。 4）严格的活细胞内寄生，没有自身的核糖体，没有个体生长，也不进行二均分裂，必须依赖宿主细胞进行自身的核酸复制，形成子代。 5）个体微小，在电子显微镜下才能看见。 6）对大多数抗生素不敏感，对干扰素敏感。 病毒是一类既具有化学大分子属性，又具有生物体基本特征；既具有细胞外的感染性颗粒形式，又具有细胞内的繁殖性基因形式的独特生物类群。（超显微的、没有细胞结构的、专性活细胞内寄生的实体） 2、定义： 迄今仍无一个科学而严谨的定义 病毒为具有独立于其宿主的进化史的绝对细胞内寄生物，它的DNA或RNA基因组被其所编码的蛋白质壳体化（encapsidation）。 （Fields等，1990年） 非细胞生物包括： A （真）病毒：至少含核酸和蛋白质二种组分 B 亚病毒： 1）类病毒：只含具侵染性的RNA组分； 2）卫星RNA：只含有不具侵染性的RNA组分； 3）朊病毒：只含蛋白质。 三、病毒的宿主范围 病毒几乎可以感染所有的细胞生物，并具有宿主特异性，按宿主可分为： 噬菌体（phage）：从原核生物中分离到的病毒。 植物病毒（plant viruses）： 动物病毒（animal viruses） 四、病毒的培养和纯化 同微生物学其他学科分支一样，病毒学的进步完全得益于研究方法和技术手段的发展。通过病毒的分离与纯化获得纯化的、有感染性的病毒制备物是病毒学研究和实践的基本技术。 1、 病毒的培养 病毒的培养：二元培养物法。 营养琼脂平板→　细菌平板成为残迹平板 营养琼脂平板→　细菌平板成为残迹平板 细菌培养液　→　 变清亮 细菌培养物　→　培养液　→ 噬菌斑（plaque）：把噬菌体和敏感细菌混合培养在营养琼脂中，由于噬菌体不断裂解细菌的结果，会在琼脂平板上形成一个个透明的空斑，这就是噬菌斑。 若是噬菌体标本经过适当稀释再接种细菌平板，经过一定时间培养，在细菌菌苔上可形成圆形局部透明区域，即噬菌斑（plague）。 噬菌斑形成与细菌菌落形成有点相似，所不同的只是噬菌斑甚至像“负菌落”，它可用于检出、分离、纯化噬菌体和进行噬菌体计数。噬菌体裂解细菌后的空斑（负菌落）。 注：把噬菌体和敏感细菌混合培养在液体培养液中会出现什么现象？ 实验动物鸡胚 实验动物 鸡胚 多种细胞培养 2）动物病毒　→ 大多数动物病毒感染敏感细胞培养能引起其显微表现的改变，即产生致细胞病变效应（cytopathic effect，CPE），例如细胞聚集成团、肿大、圆缩、脱落，细胞融合形成多核细胞，细胞内出现包涵体（inclusion body），乃至细胞裂解等。 若标本经过适当稀释进行接种并辅以染色处理，病毒可在培养的细胞单层上形成肉眼可见的局部病损区域，即蚀斑（plaque）或称空斑。 3）植物病毒　→　敏感