地西他滨联合曲古抑菌素A对胃癌细胞表型的影响及对抑癌基因MGMT表达的调控作用-老年医学专业论文.docxVIP

目 录 1.英文缩略词表……………………………………………………………1 .中文摘要 2 .英文摘要 4 4.正文 1）前言……………………………………………………………………………7 2）材料与方法……………………………………………………………………9 3) 结果…………………………………………………………………………… 29 4）讨论…………………………………………………………………………….42 5）结论…………………………………………………………………………….45 6）参考文献46 综述及参考文献53 安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 - - PAGE 13 - - - PAGE 10 - 英 文 缩 略 词 表 英文缩写 英文全称 中文全称 ATCC American Tissue Culture Collection 美国组织培养典藏中心 Bp Base pair 碱基对 6MGMT 06-Methylguanine-DNA Methyltransferase O -甲基鸟嘌呤-DNA 甲 6 基转移酶 CPG cytosine phosphate guanlsine 胞嘧啶和尿嘧啶 DEPC Diethypyrocarbonate 焦炭酸二乙酯 dNTP Deoxyribonucleotide triphosphate 脱氧核苷三磷酸 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 DNMT DNA methyltransferase DNA 甲基化转移酶 DMSO Dimethyl Sulfoxide 二甲基亚砜 HDAC DNA Histonedeacetylas deoxyribonucleic acid 组蛋白去乙酰化酶 脱氧核糖核酸 mRNA messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 PCR MSP RT-PCR polymerase Chain Reaction Methylation Specific-PCR reverse transcription-polymerase chain reaction 多聚酶链式反应 甲基化特异性 PCR 逆转录聚合酶 链反应 5-aza-dC 5-Aza-2-deoxycytidine 5-氮杂-2-脱氧胞苷 TSA PTX 5-FU WB NF-κB Trichostatin A Pacltitaxel 5-fluorouraeil Western Blotting Nuclear Factor-κB 曲古抑菌素 A 紫杉醇 5-氟尿嘧啶 蛋白免疫印迹 核转录因子 地西他滨联合曲古抑菌素 A 对胃癌细胞表型的影响及 对抑癌基因 MGMT 表达的调控作用 摘要 目的 众所周知，胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤致死原因之一，在我国，每年胃 癌的新发病例数就约占到全球人数的一半。目前，经研究发现，表观遗传学改变 是导致胃癌的重要原因，其中组蛋白的乙酰化修饰和 DNA 的甲基化改变是其主要 的两种表达形式。本研究主要通过 DNA 甲基化抑制剂 5-氮杂-2-脱氧胞苷 （5-Aza-2-deoxycitydine, 5-aza-dC）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素 A （Trichostatin A, TSA）处理不同分化程度的胃癌 MKN-45、SGC-7901 和 MGC-803 细胞株，观察药物处理前后细胞的增殖、凋亡、MGMT 基因表达水平和 NF-κB 活 性的影响以及 5-aza-dC 联合传统化疗药 5-氟尿嘧啶（5 -fluorouracil, 5-FU）和紫杉 醇（Paclitaxel, PTX）对胃癌细胞 MKN-45 生长的影响。 方法 在体外，进行胃癌细胞株 MKN-45、SGC-7901 和 MGC-803 的培养，并将实 验分为对照组， 5-aza-dC 组，TSA 组和 5-aza-dC + TSA 组以及对照组，5-aza-dC 组，5-FU+PTX 组和 5-aza-dC + 5-FU + PTX 组，利用倒置显微镜观察细胞形态的 变化，CCK-8 细胞增殖检测试剂盒和流式细胞术检测各处理组胃癌细胞的增殖和 凋亡。利用 RT-PCR 和 western blot 方法分别检测胃癌细胞系及裸鼠移植瘤组织的 MGMT 基因 mRNA 与蛋白表达、NF-κB p65 的活性及凋亡蛋白 caspase-3 的表达变 化情况，细胞免疫组化方法检测各组 Ki67 和 NF-κB p50 的表达情况。 结果 5-aza-dC 和 TSA 单独或联合用药能抑制胃癌细胞株 MKN-45、SGC-7901 和 MGC-803 的增殖，与单药组相比联合