病原生物笑学实验二.ppt

细 菌 SS平板 大肠杆菌 粉红色大菌落 痢疾杆菌 无色细小，半透明菌落 伤寒杆菌 无色细小 半透明菌落 (中间有黑色沉淀） SS培养基中菌落特点 将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培 养基。 (每个实验室8个SS平板，每组做好标记，班长用胶布按班级绑好) 放入37℃温箱中培养24h；取出放4℃冰箱中保存备用。 （三）粪便标本的分离培养 1.空气中细菌的检查（每个班2个平皿） 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 ℃ 培养24小时，观察结果。 细菌在自然界的分布 2.紫外线对细菌的影响 （每个实验室2个培养皿） 取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，打开一半平皿盖，置于紫外灯下照射30分钟，然后盖好平皿，置37℃培养24h后取出观察结果。 密涂接种 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 3. 咽喉部细菌的检查（每班4个平皿） 取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次； 盖上平皿盖，置37℃温箱中倒置培养24h后取出观察结果。 4.化学消毒剂对细菌的影响 方法：取一普通平皿培养基， 一部分写上“前”，另一部分 写上“后”，然后将手指在写 有“前”的部分沾一下，再将 手指用酒精进行消毒，在写 有“后”的部分沾一下。放入 37℃温箱培养24小时后观察。 （每个实验室4个平皿） 5.自选细菌进行培养(4个) 方法：取一普通平皿培养基，用棉签沾取生理盐水后，在手机、台面等物品上擦拭，然后涂布在平板上。 下次实验 细菌的形态学检查 药敏试验 肠道致病菌分离培养 病原生物学教研室 sqjcbwm@126.com 病原生物学实验（二） 细菌接种技术 实验目的 1 掌握常用的细菌接种方法 2 熟悉细菌生长现象的观察方法 （一）细菌的分离培养和接种技术 接种工具 接种针和接种环 L型涂布棒 接种环境 接种罩、超净工作台或无菌室内进行。 接种方法 1. 平板划线接种法： 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。 连续划线法：适用于含菌量较少的标本。 分区划线 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5. 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复. 每次划完后应灭菌. 2.斜面接种法： 用于菌种移种，以进一步鉴定 和保存菌种。 3.半固体穿刺接种法：保存菌种或观察细菌的动力和生化反应。 4.液体接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基的接种。 四种接种方法 将上述已接种细菌的培养基置37℃恒温培养箱中孵育18～24h，观察细菌的生长现象。 （二）细菌在培养基上的生长现象 1. 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 菌落与菌苔 菌落 菌苔 2. 细菌在液体培养基中的生长现象 浑浊：大多数细菌，如E.c. 沉淀：多见于链状排列的细菌。 菌膜：专性需氧菌（如结核分枝杆菌、枯草杆菌） 。 细菌在液体培养基中的生长现象 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 3. 细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌： 在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌： 只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 细菌在半固体培养基中的生长现象 有动力 现象 无动力 现象 肠道致病菌的分离培养(1) 一.肠道杆菌的生物学性状 二.S-S培养基的特性及用途 三.分离培养方法 主要内容 （一）肠道杆菌的生物学性状 埃希菌属：大肠埃希菌 沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型、丙型副伤寒 志贺菌属：痢疾志贺菌 肠杆菌科的重要菌属及代表菌种 1.相似的形态染色—从形态上无法区别 中等大小的G-杆菌 多有鞭毛、菌毛 乳糖发酵试验 肠道致病菌 肠道非致病菌 多数不发酵乳糖