甲型副伤寒沙门菌特异性基因筛选及PCR检测体系建立-食品科学.PDFVIP

※生物工程 食品科学 2018, Vol.39, No.02 151 甲型副伤寒沙门菌特异性基因筛选及 PCR检测体系建立 翟立公，王俊颖，张小雨，孟 欣，崔 葆，赵婉晴，牛 萍 （安徽科技学院食品药品学院，安徽滁州 233100 ） 摘  要：以甲型副伤寒沙门菌为检测目标，通过比较基因组和聚合酶链式反应（polymerase chain reaction ， PCR ）验证方法筛选到4 个该血清型的特异性基因，其中以gene_3105 作为该血清型的检测靶点设计引物PA23 ； 并结合沙门菌属特异性引物139-141，建立一种甲型副伤寒沙门菌的PCR 检测方法。优化PCR 反应体系，并 对该检测体系的特异性、灵敏度、抗干扰能力及人工污染样品检出限等方面进行评价。结果表明，当样品 中含有甲型副伤寒沙门菌时，该体系能扩增出2 条特异性条带，含有其他血清型的沙门菌仅能扩增出284 bp / 条带，不含沙门菌无扩增条带产生。灵敏度评价表明，基因组DNA 和纯菌菌落检出限分别为32.4 pg µL 和 3 / 6 / 7 / 4.3 ×10 CFU mL ；抗干扰能力实验显示，当鸡肉背景菌群和猪肉背景菌群浓度在10 CFU mL和4.87 ×10 CFU mL 4 / N / 时，检出限为6.43 ×10 CFU mL 。当无菌的鸡肉和猪肉样品中添加 CFU 25 g 甲型副伤寒沙门菌时，经10 h增菌， N 检测结果为阳性（0 ＜ ＜10）。实验建立甲型副伤寒沙门菌PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度，有很好的应 用价值，可在食品安全领域广泛应用。 关键词：甲型副伤寒沙门菌；比较基因组；血清型特异性基因；聚合酶链式反应 Mining of New Specific Molecular Targets and Development of a PCR Assay for Specific Detection of Salmonella Paratyphi A ZHAI Ligong, WANG Junying, ZHANG Xiaoyu, MENG Xin, CUI Bao, ZHAO Wanqing, NIU Ping (College of Food and Drug, Anhui Science and Technology University, Chuzhou 233100, China) Abstract: In this study, four serotype-specific genes of Salmonella Paratyphi A were identified by comparative genomics and PCR. A PCR assay based on the gene_3105 and invA gene was developed and evaluated