双向调控骨吸收和骨生成防治骨溶解疾病的新手段-外科学（骨科）专业论文.docxVIP

上海交通大学 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密口，在一年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密口。 (请在以上方框内打“√”) 学位论文作者签名： 翟焚 指导教师签名： 日期：知f岁年乡月Io日 日期：力雪年岁月IO日 万方数据 上海交通大学 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本 文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者躲褪磺写、 日期：山雪年’月70日 万方数据 上海交通大学博士学位论文双向调控骨吸收和骨生成防治骨溶解疾病的新手段 上海交通大学博士学位论文 双向调控骨吸收和骨生成防治骨溶解疾病的新手段 摘要 背景和目的 无菌性松动是人工关节置换远期失效的主要原因，而磨损颗粒诱导的假体周围骨溶 解则是造成无菌性松动的罪魁祸首。这一过程的发生与以下三个因素密切相关：炎性因 子浸润、骨吸收亢进及骨生成障碍。三者相互促进，我们对任何一方的轻视，都将在无 菌性松动的防治中付出代价。与此同时，感染也是关节置换的主要并发症之一，其结果 具有灾难性，假体常需取出，并行二次翻修术。研究表明，内植物表面细菌黏附和生物 膜的形成是假体感染形成的关键环节。而矛盾的是，骨内植物需满足良好的生物相容性， 促进成骨细胞黏附以利于骨整合，但这无疑又会促进细菌黏附进而增加感染的机会。因 此，理想的骨内植物材料需兼顾促进骨整合和抗感染活性。本课题拟针对磨损颗粒诱导 骨溶解的发生机制，从对抗炎症因子释放、抑制骨吸收及促进骨形成的角度出发，探讨 镁降解产生的局部微环境在防治假体无菌性松动中的潜在应用价值。并观察镁作为骨内 植物的抗感染性能。同时，从调控机体全身骨代谢为出发点，探讨植物天然提取物穿心 莲内酯(Andrographolide)的全身骨保护作用。以期从局部及全身出发，对抗磨损颗 粒诱导骨溶解的发生，为防治假体无菌性松动提供新手段。 内容与方法 1．按照国标IS010993浸泡镁(99．9％)模拟镁降解产物(Magnesium Degradation， MgD)，观察镁降解产物对单核．巨噬细胞(BMMS)增殖、破骨细胞分化及骨吸收功能 的影响，探讨其引起的破骨细胞应答反应；建立磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型，利用 micro．CT、组织形态计量等评价镁降解产物对骨溶解的抑制效果。观察镁降解产物对骨 髓间充质干细胞(BMSC)粘附、铺展、增殖及向成骨细胞分化的影响，探讨其引起的 hBMSC应答反应。 2．体外观察镁(99．9％)的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)效果，建立 SD大鼠骨髓炎模型，将镁棒作为髓内钉放入大鼠髓腔内，观察对骨髓炎的治疗效果和 周围骨量的改变，并探讨作用机制。 3．通过观察AndrographoIIde对成骨细胞和破骨细胞分化及功能的影响，探讨其引 万方数据 上海交通大学博士学位论文起的骨应答反应，并阐述其作用机制；建立磨损颗粒诱导局部骨溶解模型和LPS诱导 上海交通大学博士学位论文 起的骨应答反应，并阐述其作用机制；建立磨损颗粒诱导局部骨溶解模型和LPS诱导 全身炎症性骨丢失模型，腹腔注射Andrographolide，利用micro—CT、组织形态计量等 评价Andrographolide对小鼠局部和全身的骨保护作用。 结果 1．镁降解产物通过抑制破骨细胞特异性转录因子NFATcl的转录活性，进而显著抑 制破骨细胞形成和骨吸收功能；在磨损颗粒诱导骨溶解小鼠体内，镁降解产物降低组织 中活化破骨细胞数量和炎症因子TNF．0c、IL．1 p及RANKL水平，显著抑制骨丢失。此 外，镁降解产物提高BMSC表面integrin a3／a5／lBl表达水平，促进BMP2下游SMADs 复合物核转位，增强BMSC增殖、黏附及成骨分化功能，但并不利于胞外钙沉积。 2．镁在体外显著抑制MRSA的粘附和生物膜的形成，这可能得益于镁降解产生的 碱性环境。同时，镁植入骨髓腔后显著抑制骨髓炎的进展，并有大量新生骨。 3．体外研究发现，Andrographolide通过抑制RANKL下游p65入核和ERK磷酸 化，进而发挥抑制破骨细胞功能的作用。与此同时，AndrographoI．de提高成骨标志性 基因的表