硫酸软骨素酶abc联合骨髓间质充干细胞对大鼠脊髓损伤修复作用的研究-临床医学；外科学（神经外科）专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 天津医科大学硕士学位论文中又摘要 天津医科大学硕士学位论文 中又摘要 【目的】建立大鼠脊髓右侧半横断损伤模型，通过大鼠侧脑室置管途径联 合应用硫酸软骨素酶ABC(ChABC)和骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗脊髓损伤， 分析评价侧脑室途径给药方法的可靠性以及ChABC和BMSCs联合应用在治疗脊 髓损伤后可能的作用机制。 13法】密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离大鼠骨髓间充质干细胞，细胞 于移植前通过DAPI进行标记，调整细胞浓度备用。雄·I生Sprague．Dawley大鼠120 只，建立右侧脑室置管及右侧第1 0胸节脊髓半横断损伤模型，然后随机分为4组： 损伤组(A)，BMSCs移植治疗组(B)，ChABC治疗组(C)及ChABC和BMSCs联合治 疗组(D)，每组30只。其中依据取材时间点及实验目的将A、B、C、D各组大鼠 再随机分为术后第3天、第7天、第14天、第21天、第30天以及BDA示踪六个亚 组，每个亚组5只(n=5)。A组于损伤后即通过留置管给予69tl PBS，以后每两天一 次，共6次；B组于损伤后第6天通过侧脑室留置管给予含有BMSCs的PBS (5x10 7cells／m1)；雹t：液30ttl；C组于损伤后即经留置管给予6“1 ChABC(100U／m1)，以 后每两天一次，共6次；D组联合应用上述ChABC和BMSCs，给药途径、剂量及 时程与上述单独使用时相同。各时间点采用BBB评分法观察大鼠后肢运动功能 情况，然后取材固定以HE染色观察脊髓组织形态学变化，应用免疫组化方法检 测各组脊髓损伤区生长相关蛋l刍43(GAP一43)与补I经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的 变化情况。术后第14天BDA示踪亚组大鼠(舻5)行BDA顺行示踪染色。 【结果】 1．脊髓损伤后各组大鼠均出现典型右后肢瘫痪，损伤后第3天A、B、C、D 四组I司BBB评分无统计学差异(PO．05)；损伤后第7、14、21天，B、C、D三组 与A组问有明显统计学差异妒0．01)，D组与B、C组间有统计学差异∽0．05)。 2．HE染色结果显示脊髓伤后A组大鼠脊髓星形胶质细胞大量增生，胶质瘢 痕及空洞形成，B、C、D三组损伤后胶质瘢痕均比A组少。脊髓伤后第21天，A 组可见胶质瘢痕面积明显扩大，组织结构紊乱且不连续；B组空洞不再继续扩大 并有缩小趋势，可见少量胶质瘢痕填充在断端；C组头侧与尾侧有少量白质穿过 损伤区相接触，瘢痕区域明显减小；D组神经元形态改善，邻近脊髓空洞范围明 显缩小，组织结构连续。 3．将DAPI标记的BMSCs经大鼠侧脑途径移植，各组大鼠不同时间点脊髓 天津医科大学硕士学位论文损伤部位均可见带有蓝色荧光标记的 天津医科大学硕士学位论文 损伤部位均可见带有蓝色荧光标记的BMSCs。D组术后第21天在脊髓损伤部位 仍可见大量阳性标记的BMSCs细胞存活。 4．损伤后第21天B、C和D三治疗组的GAP．43阳性细胞数达到高峰，阳 性细胞数多且染色深；损伤后第14、21、30天时， B、C、D三组与A组间损 伤区GAP．43阳性细胞百分率有明显统计学差异俨0．01)，B和D组间有统计 学差异∽0．05)，B、D两组与C组间有明显统计学差异(Po．01)； 5．各组脊髓损伤后损伤区GAFP表达均随时间发展逐渐增强，第14天达到 高峰。损伤后第7，14，21、30天，B、D两组与A组的GFAP染色阳性面积比 较，有显著统计学差异(P0．01)；C组与A组比较，仅第21天有统计学差异意 义俨0．01)。损伤后第7，14，21天，D组与B组比较有统计学差异沪0．05) 6．BDA注射后2周镜下观察结果显示，A组损伤平面以下BDA阳性神经纤 维最少，B、C组有部分神经纤维通过损伤平面向下传导，D组BDA阳性神经 纤维通过损伤平面数量最多。定量分析显示D组与其余各组比较差异有显著统 计学意义(Po．01)，B、C与A组比较差异亦有统计学意义(PO．05)，B和C 组间比较差异有统计学意义伊0．05)。 【结论】 1．大鼠侧脑室留置导管给药途径安全稳定，移植细胞及药物通过脑脊液循环 能有效到达脊髓损伤处，BMSCs存活率高。此法适合长时间多次药物干预的实 验研究，可避免多次麻醉带来的风险和影响。 2．大鼠脊髓损伤后ChABC可以有效分解CSPGs，抑制损伤部位胶质瘢痕形 成，为轴突再生提供有利微环境，从而问接促进轴突再生。 3．联合应用ChABC与BMSCs可上调GAP．43的表达，改善受损神经元形态， 从而对脊髓损伤后轴突再生起到促进作用 4．脊髓损伤后GFAP表达增加，联合应用Clu蛆C和BMSCs能够相互仂、同， 可明显抑制胶质细胞的反应性增生，从而}$$OGFAP的表达，同时ChABC能有效 降