基于酶扩增的新型dna水凝胶的构建及其应用-分析化学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 A A noVel enzymatic polymerization based synthesis strategy for DNA hydrogel and its application by XIANG Binbin B．S．(Hunan UniVersity)2013 A thesis submitted in partial satisfaction of the Requirements for the degree of Master of Science Analytical Chemistry in the Graduate Sch001 of Hunan Universitv SuperVisor Professor NIE Zhou June 2016 万方数据 湖南大学 湖南大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所 取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任 何其它个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡 献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的 法律后果由本人承担。 作者签名： 、句桶硝 日期：加J6年6月≥日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权湖南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇 编本学位论文。 本学位论文属于 l、保密口，在 年解密后适用本授权书。 2、不保密团。 (请在以上相应方框内打“、／”) 作者签名：向桶斛{ 日期：)D1《，年(7月2曰 导师签名： 釉 日期： 为“年易月≥日 万方数据 硕士学位论文捅 硕士学位论文 捅惦 要面 功能水凝胶作为一种新型生物材料，由于其物理机械性能与生物组织的类似 性，已经成为生物医学领域一种重要的生物材料。近几年来，DNA水凝胶得到了 快速发展，由于其优异的生物相容性、可降解性以及易于功能化等优点，DNA水 凝胶在生物传感、药物的运载与释放、蛋白的体外表达以及单细胞操控等方面都 有着广泛的应用。但是以往DNA水凝胶的合成方法中，往往需要大量的DNA作 为原料，极大增大了合成成本，限制了DNA凝胶的发展。因此，本文中，我们 基于末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化聚合性能，以二维或者三维DNA纳米 材料作为基本结构单元，开发了两种简便、快捷且成本低的方法构建DNA水凝 胶，并且将其应用于物质的包裹及可控释放，蛋白的富集，和多酶反应体系的构 建，具体如下： 1．基于TdT无模板扩增DNA的性能，以十字交叉型DNA结构(x—DNA) 作为基本结构单元，构建了一种合成DNA水凝胶的新方法。该方法中，以X．DNA 为引物，通过TdT扩增将三磷酸脱氧胸苷(dTTP)和三磷酸脱氧腺苷(dATP) 添加至X—DNA的3’．羟基末端，合成四端带有富含胸腺嘧啶(T)的X．DNA-Tn 和富含腺嘌呤(A)的X．DNA—An，然后利用A．T碱基互补配对，自组装形成DNA 水凝胶。本方法中，TdT的引入极大的减少了水凝胶合成中初始DNA的用量， 由原来的数十微摩级别降低到几个微摩，从而降低了成胶成本。另外，我们考察 了这种凝胶形成的机理，发现带有富A序列或者带有富T序列x—DNA无法单独 形成凝胶，且以线性DNA为引物合成的富A序列与富T序列的杂交以及错配碱 基(如A／C)的扩增产物都无法合成水凝胶。这些结果表明，该凝胶的合成中以 十字交叉型DNA作为中心点，而延伸臂作为交联剂，二者缺一不可。接着，利 用流变仪、扫描电子显微镜、原子力显微镜分别表征其力学性能、表面形貌以及 内部结构。最后，我们探究了该DNA水凝胶在大分子物质的封装以及可控释放 方面的应用。 2．利用上述通用型的合成方法构建了一种功能DNA水凝胶一DNA酶水凝胶 (DNAzyme hydrogel)。将一段DNAzyme(Dz)序列连接于上述X．DNA结构上， 形成Dz．X．DNA。该结构在一些阳离子(K+)存在的情况下，能够形成鸟嘌呤一 四链体，与氯化血红素(hemin)结合后具有模拟过氧化物酶活性，能够催化H202 氧化ABTS2一产生绿色产物ABTS。。首先，我们以Dz．X．DNA作为结构单元合成 DNAzvme水凝胶，探索了其过氧化物酶活性，并且将其用于H202的可视化检测。 基于这一现象，我们发展了两种生物酶串联体系：结合葡萄糖氧化酶(GOx)构 万方数据 基于酶扩增的新型DNA 基于酶扩增的新型DNA水凝胶的构建及其应用 建了双酶串联体系；将G0x以