基于近红外荧光的甲基化及其基因表达检测新技术的研究-生物医学工程专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 隶。轫大· 隶。轫大·粤 博士学位论文 基于近红外荧光的甲基化及其基因表达检 测新技术的研究 研究生姓名：螳 本论文获中国国家自然科学基金和江苏省科技支撑计划(BE2012741)资助。 万方数据 S S TUDY ON THE NEW TECHNIQUE S FOR THE DETECTION OF METHYLATION AND GENE EXPRES SION THAT ARE BASED ON NEARⅢFRARED FLUORE S CENCE A Thesis submi仕ed‘。 IIIIIIIIIINIHIIIIIINIIIIIIIIII Southeast University Y27826 1 3 For the Academic Degree of Doctor of Engineenng BY CHEN YING Supervised by Prof．WANG Jin-ke School of Biological Science and Medical Engineering Southeast University January 2015 万方数据 东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 东南大学学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包 含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育 机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何 贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 盛， 堇 日期： 东南大学学位论文使用授权声明 东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学 位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外， 允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内 容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权 东南大学研究生院办理。 研究生签名： 睦立导师签名 日期： 2．ol堂·／．to 万方数据 中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 表观遗传学是研究不涉及DNA序列改变的基因表达和调控的可遗传变化，其中， 甲基化是最常见的DNA表观遗传修饰。DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、 DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。因此，甲基 化与癌症、衰老、老年痴呆等众多疾病密切相关。为了研究DNA甲基化对基因转录 的调节作用，必须精确地检测基因组中的DNA甲基化。目前，检测DNA甲基化的方 法各种各样，但绝大多数程序较为繁琐，且不能将甲基化检测结果与基因表达调控效 应联系起来，难以用于基因表达的表观遗传调控机制的研究。因此，建立一种简单而 高效的可同步检测DNA甲基化及其基因表达调控效应的新技术非常必要。研究表明 多种基因启动子区相关CpG岛的高甲基化所导致的表观遗传学沉默通常与疾病相关。 基于此目的，结合我们实验室多年研究的双链DNA微阵列(dsDNAmicroarray)技术， 我们建立了一种可同步检测基因甲基化，特别是转录因子结合位点(TFBS)DNA甲 基化及其基因表达调控效应的新方法。同时，本课题对该技术进行扩展，选取不同的 固相载体材料分别从甲基化和基因表达检测等方面入手进行新技术的创新。 本论文取得的主要结果如下： 1．尼龙膜是一种合成的长链聚酰胺薄膜，对核酸和蛋白质具有很强的结合能力， 近红外荧光(NIRF)具有高灵敏度，高信噪(S／N)比等特点。基于以上两种优点， 本研究建立了一种基于膜的近红外荧光法(M．NIFA)检测DNA甲基化及其基因表达 调控。该方法基于双链DNA微阵列(dsDNAmicroarray)技术包含两个检测系统，即 甲基化和转录本检测系统。前者通过使用抗5一甲基一胞嘧啶抗体(5-MC抗体)检测 DNA甲基化，后者则通过生物素化的cDNA检测基因的转录本。5MC一抗体和生物素 的信号可以被近红外荧光标记的第二抗体和链霉亲和素所报告，两个检测系统的可行 性，可通过人工合成的修饰有甲基和生物素的寡核苷酸得以验证。本文最后选取结肠 癌细胞(LOVO细胞)中己知的高甲基化基因pJ『一肛进行甲基化和转录本的检测，检 测结果表明该方法的可靠性。该研究提供了一种新方法可以同时检测DNA甲基化及 基因表达调控，另外该方法免亚硫酸氢盐处理和PCR扩增，具有宽动态范围和较高灵 敏度。新技术的建立有助于更好的探索DNA甲基化及基因