菌毛及纳米材料对地杆菌胞外电子传递影响的研究-生物医学工程专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 THE THE EFFECT OF PILI AND NANOMATERIAL S ON THE EXTRACELLULAR ELECTRON TR ANSFER OF GE0曰么C唧 A Dissertation Submitted to Southeast University For the Academic Degree of Doctor of Engineering BY Xing Liu Supervised by Prof．Zhongze Gu School of Biological Science and Medical Engineering Southeast University October 201 5 万方数据 东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 东南大学学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名：乒日期：型牛 东南大学学位论文使用授权声明 东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文 的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档 的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借 阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大 学研究生院办理。 研究生签名： 圣j曼 导师签名： 万方数据 中文摘要 中文摘要 菌毛及纳米材料对地杆菌胞外电子传递影响 的研究 中文摘要 产电菌(Electricigens)通过分解代谢有机物释放电子，电子通过结合于细胞内 膜上的电子传递链传递并提供微生物代谢活动所需的能量，而电子最后通过一种被 称作“胞外电子传递”(EET)的方式传递给环境中的电子受体。EET在环境的生物 地理化学循环、生物电化学系统和生物修复等领域发挥着重要的作用并正成为学术 界研究的热点。硫还原地杆菌(Geobactersulfurreducens)是被人们广泛研究的一种 土壤中广泛存在在严格厌氧细菌，其通过EET代谢环境中的电子受体并影响着土壤地 质的组成与土壤的生物修复、构成了微生物燃料电池生物阳极优势菌种。 G．su／furreducens(Gs)代谢胞外电子受体需要多种物质的协作，比如细胞色素C、 菌毛(Gs—pili)、土壤中的矿物等。本论文将分别从菌毛和纳米材料两个方面研究它 们对EET的影响。Gs-pili是Gs完成胞外电子传递所必须的，然而对于其在EET过程中 发挥的具体功能学术界还没有一个统一的结论，甚至于编码Gs-pili蛋白单体(Gs—PilA) 的基因(Gs．pila)尚无明确的定义。本研究首先定位TGs．pila并分析其开放阅读框结 构。然后构建了Gs异源菌毛蛋白表达系统，并通过表达不同组成与结构的菌毛来研 究菌毛对Gs胞外电子传递的影响。 产电菌可以稳定地利用阳极作为电子受体并实现电能的输出，而阳极修饰可以 显著地提高产电菌代谢阳极的能力。本论文选取石墨烯及其复合物来修饰阳极从而 研究纳米材料对Gs[gf]极胞外电子传递的促进作用。具体工作内容如下： (1)使用组氨酸标签标记预测的Gs．pila，通过电镜免疫胶体金染色法证明组氨酸 标签标记的蛋白参与TGs．pili的组成从而定位了Gs—Pi执编码基因。Gs-pila具有两个 潜在的翻译起始密码子(ATG和TTG)，可能形成两种Gs．PilA前体蛋白单体。通过 分析仅表达单种Gs．Pi执前体蛋白的突变株的Gs-pila的转录及相应表型，证明Gs-pila 仅具有唯一的翻译起始密码子(ATG)。 (2)构建可以表达Pseudomonas aeruginosa PA01菌毛蛋白(PA．PilA)的Gs突变 株(Gs．PA)，证明了异源四型菌毛蛋白可以在Gs中表达并正确的组装同时发现Gs． PA胞外细胞色素C的分布没有改变。通过表征Gs．PA胞外电子受体代谢，研究 万方数据 东南大学博士学位论文 东南大学博士学位论文 P．aeruginosa PA01菌毛(PA．Pili)对Gs胞外电子传递的影响。 (3)改变Gs．Pi执中芳香族氨基酸的数目或者标记细胞色素PpcA于Gs．Pi认上，研 究不同组成的Gs．PilA对Gs胞外电子传递的影响。同时，构建可以表达Geobacter metallireducen、Geob