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生物化学（普通生物化学）考研答疑 蛋白质化学 酶 蛋白质的分解和氨基酸代谢 核酸化学 核酸的分解和核苷酸代谢 生物氧化 一、蛋白质的组成（元素组成，化学组成） 二、蛋白质的结构 （一级、二级、三级、四级结构） 三、蛋白质的性质 （等电点、分子量、胶体、沉淀反应、颜色反应、变性与复性） （一）蛋白质的元素组成： C、H、O、N 及少量的 S 特点：N 在各种蛋白质中的平均含量为16% 因为样品含氮量平均在16%，取其倒数100/16=6.25，即为蛋白质换算系数，其含义是样品中每存在1g元素氮，就说明含有6.25g 蛋白质）；故：凯氏定氮法 蛋白质含量=蛋白质含氮量×6.25 优点：对原料无选择性，仪器简单，方法也简单。 缺点：易将无机氮(如核酸中的氮)都归入蛋白质中。 (二）蛋白质的水解 1、完全水解：用浓酸、碱将蛋白质 完全水解为氨基酸。 酸水解：无消旋作用，产物为L-氨 基酸。 碱水解：多数氨基酸被破坏，有消 旋现象。 2、部分水解： 一般用酶或稀酸在较温和条件下，将蛋白质分子切断，产物为分子大小不等的肽段和氨基酸。 （三）氨基酸 氨基酸是蛋白质水解的最终产物，是组成蛋白质的基本单位。从蛋白质水解物中分离出来的氨基酸有二十种，除脯氨酸和羟脯氨酸外，这些天然氨基酸在结构上的共同特点为： (1)与羧基相邻的α-碳原子上都有一个氨基，因而称为α-氨基酸。 (2)除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的α-碳原子都为不对称碳原子。目前已知的天然蛋白质中氨基酸都为L-型。 （3）按R基团的极性分： 极性氨基酸： 极性不带电荷：丝、苏、天冬酰胺、 谷氨酰胺、酪、半胱、 极性带正电荷：组、赖、精、 极性带负电荷：天冬、谷、 非极性氨基酸：甘、丙、缬、亮、异亮、 苯丙、甲硫、脯、色、 （4）按人体是否可合成来分： 必需氨基酸：机体不能自身合成，必须由食物供给的氨基酸。 甲硫、色、赖、缬、异亮、亮、苯丙、苏、 半必需氨基酸：人体可合成，但幼儿期合成速度不能满足需要。 组*、精*、 非必需氨基酸：机体可自身合成的氨基酸。 （5）氨基酸的重要理化性质 (1)光吸收：构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(220nm)均有光吸收。在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。 (2)氨基酸两性解离与等电点： 氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是离解成两性离子。在两性离子中，氨基是以质子化(-NH3+)形式存在，羧基是以离解状态(-COO-)存在。 在电场中，阳离子向负极移动；阴离子向正极移动； 调整pH，使aa净电荷为零时，aa既不向阳极也不向阴极移动。 规定aa净电荷为为零时的pH为该aa的等电点 等电点相当于该aa两性离子状态两侧 基团pK值之和的一半。 a、各种aa的pI不同； b、同一pH下，各种aa所带电荷不同； pH＜pI ：aa+ 在电场中向负极移动 pH＞pI：aa- 在电场中向正极移动 用离子交换、电泳将aa分开 c、处于pI时，aa溶解度最小，易沉淀； 可分离aa。 （3）氨基酸的性质 （1）与茚三酮的反应： α-氨基酸与水合茚三酮溶液共热，引起aa氧化脱氨、脱羧，水合茚三酮与反应产物（氨和还原型茚三酮）生成兰紫色化合物（Pro和Hyp呈黄色），色深与溶液中氨基浓度成正比。 （2）与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应 鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 （3）与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应 用于N末端分析，又称Edman降解法 二、蛋白质的结构 肽和肽键的结构 由两个氨基酸组成的肽称为二肽，由多个氨基酸组成的肽则称为多肽。组成多肽的氨基酸单元称为氨基酸残基。 （一）蛋白质的一级结构 1、蛋白质的一级结构(Primary structure) 即多肽链内氨基酸残基从N-末端到C-末端的排列顺序，或称氨基酸序列，是蛋白质最基本的结构。 包括： (1)组成蛋白质的多肽链数目. (2)多肽链的氨基酸顺序， (3)多肽链内或链间二硫键的数目和位置。 ★其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白