胶质瘤中rac1蛋白表达和其在恶性胶质瘤侵袭中作用的研究-临床医学；外科学神外专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 恶性胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，约占成人颅内肿瘤的30％ 50％。近年来，尽管恶性胶质瘤的治疗己得到了值得关注的发展，但是恶性胶质 瘤病人的预后并没有得到明显改善，胶质母细胞瘤患者的中位生存时间仍不足 15个月 。恶性胶质瘤分化程度差、缺乏凋亡、富含血管、增殖活性高和呈侵袭 性生长。其中侵袭性生长是恶性胶质瘤最突出的生物学行为之一，也是导致肿 瘤复发、远隔迁移和难以治愈的主要原因f2】。小部分具有极强迁移和侵袭能力的 肿瘤细胞早期即向肿瘤周围及正常脑组织浸润，在远离原发灶处形成大量的微 肿瘤，从而免于手术切除和放射暴露【3】。研究认为这些细胞即是脑肿瘤干细胞HJ。 恶性胶质瘤的侵袭迁移是肿瘤细胞与宿主细胞及细胞外基质相互作用的复 杂过程。肿瘤细胞的侵袭过程一般可分为三个步骤，首先在黏附分子的介导下 粘附于细胞外基质(ECM)；在基质金属蛋白酶(MMPs)等作用下降解ECM；通过旁 分泌和自分泌的一些因子下细胞肌动蛋白骨架发生重组，形成伪足迁移运动【5j。 其中，细胞的迁移运动是其关键环节。细胞的迁移运动由多种信号分子调控， 其中肌动蛋白骨架及其调控蛋白最为重要【6】【71。当细胞运动时，肌动蛋A骨架发 生动态重组形成片状伪足，为细胞运动提供必要的力量【8J。Racl是重要肌动蛋白 骨架调控蛋白，控制板状伪足的形成。Racl激活其下游效应因子，并和这些效 应因子共同转运至细胞运动前端的细胞膜下，诱导肌动蛋白骨架重组，产生片 状伪足，从而促进细胞运动。目前已经发现Racl在乳腺癌、结肠癌及卵巢癌中 表达均明显增高，且其高表达与肿瘤的侵袭转移密切相关【l卜13】。 本课题主要讨论Racl在胶质瘤组织中的表达及分布特点；对胶质瘤细胞迁 移和侵袭的调节；以及其阳性细胞与胶质瘤干细胞的联系，Racl在脑胶质瘤干 细胞迁移和侵袭中的作用，分为以下三个部分： 1．Racl在胶质瘤中的表达及其分布特征。为探讨胶质瘤细胞的迁移方式及 Racl的表达与胶质瘤病理分级的相关性，我们收集2009年6月至lJ2010年6月新诊 断的65例人脑胶质瘤标本，每份标本通过术中导航精确的选取了肿瘤中心组织、 肿瘤和水肿交界区组织，进行免疫组织化学染色和western blot分析。Western blot 结果发现正常对照脑组织中Racl不表达或呈低表达，恶性胶质瘤中Racl的表达 水平显著提高(F=41．18，PO．0001)；免疫组织化学染色检测发现，Racl在不 同病理级别胶质瘤中的表达差异有统计学意义(H=34．935，P=-O．000)，Racl的表 天津医科大学硕士学位论文达与胶质瘤的分级呈正相关 天津医科大学硕士学位论文 达与胶质瘤的分级呈正相关(rs=0．682，P0．01)，胶质母细胞瘤实体区、肿瘤与脑 组织交界区均有阳性细胞染色。在胶质母细胞瘤交界区Racl阳性细胞在血管周 围呈放射状和平行于白质纤维束分布。 2．Racl在SDF．1诱导人脑胶质瘤细胞迁移和侵袭中的作用。我们通过特异 性的Racl活性抑制剂下调Racl的活性，探讨Racl在基质细胞衍生因子 1(Stromal cell-derived factor-1，SDF．1)诱导的人恶性胶质瘤细胞迁移和侵袭中的 作用。取U251细胞分为三组，NSC23766预处理组：无血清培养基培养3小时 后，于无血清培养基中加入NSC23766(终浓度为100 la mol／L)预处理3h后， 给予SDF．1(100nmol／m1)处理3min；SDF．1处理组：无血清培养基培养3小 时，于无血清培养基中加入20 p l PBS替代NSC23766孵育3h后，给予SDF．1 (100nmol／m1)处理3min；对照组：无血清培养基培养3小时，于无血清培养 基中加入20 u l PBS替代NSC23766孵育3h后，给予20 u l PBS替代SDF．1对 照处理：倒置相差显微镜下观察各组U251细胞的形态变化：细胞迁移实验和 Transwell细胞侵袭实验评价不同处理组U251细胞迁移和侵袭能力的差别；Racl 活性实验和Western blotting分别检测不同处理组U251细胞中GTP．Racl、总Racl 蛋白及其下游蛋白的表达水平；免疫荧光法检测不同处理组U251细胞中伪足形 成、Racl的表达及其细胞内定位。结果：对照组比较，SDF．1(100nmol／m1)刺 激细胞伸出巨大的片状伪足；SDF．1处理组细胞迁移和侵袭能力明显强于对照组 细胞(P0．05)； SDF．1对细胞内Racl活化有明显的刺激作用(PO．05)，并且 细胞运动前端的胞膜下可见Racl蛋白聚集