基因操作原理dis蛋play基因展示技术.ppt

携带ctc-(6His)n融合基因重组菌的构建 将pBMB-SHAn系列重组质粒转入受体菌171/pBMB-CSA中 将pBMB-SHBn系列重组质粒转入受体菌4Q7/ pBMB-CSA SDS检测融合蛋白的表达 CTC-(6His)n融合蛋白活性的检测 CTC-（6His）n融合蛋白对镍离子的吸附 CTC-（6His）n融合蛋白对镉离子的吸附 CTC-（6His）n融合蛋白对镉离子的吸附 定量测定 采用全谱直读等离子体发射光谱仪测定 使用波长为228.802nm 2.Aii抗病蛋白在细胞表面的展示 ctc-aii融合基因 的构建 CTC-Aii融合蛋白活性的检测 解离载体pBMB801的构建及解离 resolution ori/ts Tc ori/E Amp tnpI tnpA 2. 整合在染色体 转座子整合载体 三、S-层蛋白用于表面展示的前景 信号肽 SLH 锚定序列 1．六聚组氨酸肽Poly(His)6 Poly(His)6)对重金属二价阳离子如镉(Cd2+)、镍(Ni2+)、铜(Cu2+)、锌(Zn2+)和铅(Pb2+)等具有螯合(吸附)作用, 可用于重金属污水处理 目前几乎所有的表达重金属结合能力的细菌都限定在大肠杆菌 成功的重组菌在固定化之后在重金属污水处理方面，以及重金属矿物富集方面将有重要的应用潜力 金属硫蛋白具有相似作用 ctc-(6His)n融合基因的构建 6His PCR产物电泳图 1 2 3 1，100bp Ladder；2，3，6His PCR产物 PvuII PCR XbaI PvuII EcoRI XbaI HincII SphI EcoRI XbaI SphI EcoRI KpnI BamHI XbaI SalI SphI slh XbaI (6His) slh (6His)1 slh (6His)1 pBMB-982 pHT304 重组质粒pBMB-SHA1构建示意图 pBMB-SHA1 重组质粒pBMB-SHB1构建示意图 XbaI (6His) XbaI PCR XbaI XbaI XbaI pBMB982-304 slh (6His)1 pBMB-SHB1 slh (6His)1 EcoRI SalI XhoI slh (6His)1 EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI EcoRI+SalI EcoRI SalI XhoI EcoRI+ XhoI EcoRI SalI XhoI ctc-(6His)2融合基因的构建 slh (6His)2 EcoRI SalI XhoI slh (6His)1 EcoRI SalI XhoI EcoRI+ XhoI EcoRI+ SalI EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI ctc-(6His)3融合基因的构建 EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI EcoRI SalI XhoI ctc-(6His)1 ctc-(6His)2 ctc-(6His)3 ctc-(6His)6 ctc-(6His)9 ctc-(6His)15 ctc-(6His)12 ctc-(6His)18 ctc-(6His)n融合基因构建示意图 1 2 3 4 5 6 7 8 重组质粒pBMB-SHAn酶切验证电泳图 1，λ/HindIII分子量标准 2，pBMB-SHA18/ClaI+XhoI 3，pBMB-SHA12/ClaI+XhoI 4，pBMB-SHA6/ClaI+XhoI 5，pBMB-SHA3/ClaI+XhoI 6，pBMB-SHA2/ClaI+XhoI 7，pBMB-SHA1/ClaI+XhoI 8，100bp Ladder 重组质粒pBMB-SHBn酶切验证电泳图 1 2 3 4 5 6 7 1，λ/HindIII分子量标准； 2，pBMB-SHB15/ClaI+XhoI； 3，pBMB-SHB9/Cla