基于转录组分析的哈茨木霉thga1基因功能研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了 明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 轴、音 时间： 20 15年s月2弓日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科 学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不 同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名：孑小青 时间： 劲f5年5月蝎日 导师签名： 套袖 时间： 勋Ⅳ年f月才日 万方数据 中国农业科学院 中国农业科学院 硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 论文题目 基于转录组分析的哈茨木霉Thgal基因功能研究 论文作者 孙青 专业 生物化学与分子生物学 研究方向 环境微生物与基因 工程 指导教师 李梅 培养单位(研究所、中心) 植物保护研究所 姓名 职称 单 位 专业 签名 中国农业大学农学 宋渊 教授 微生物学 评 与生物技术学院 阅 杨秀芬 研究员 中国农业科学院植 生物化学与分子生物 一物保护研究所 人 辩 中国农业大学农学 掀÷ 答 主 杨定 教授 农业昆虫与害虫防治 与生物技术学院 席 中国农业科学院植 邱德文 研究员 物保护研究所 农业微生物学 砺彳驭 中国农业科学院植 生物化学与分子生物 私 究所 农业昆虫与害虫防治 摊 张杰 研究员 物保护研究所 学 答 中国科学院动物研 张润志 研究员 辩 研究所 J训又’ 中国农业大学草地 I ／ 张英俊 教授 草业科学 委 贝 会议记录(秘书) 吨砌乱 论文答辩时间地点 2015．05．19 中日楼301会议室 万方数据 摘要木霉菌 摘要 木霉菌(Trichoderma)是一类重要的生防真菌，具有适应性强、抗菌谱广、诱导植物抗性和 多重拮抗作用机制等特点。木霉菌生防相关基因的表达由内源信号途径所调节，G蛋白介导的信 号传递系统是真核生物中一类重要的细胞跨膜信号传递系统，在细胞外信号向胞内传递及调控细 胞内反应中起到关键的分子开关的作用。本实验室从生防菌哈茨木霉Th．33中克隆到一种I型G蛋 白0【亚基基[园Thgal，Thgal基因敲除后，突变株的生物学特性和理化特性均发生显著变化，包括 菌丝生长速度下降，分生孢子梗分枝和产孢量均减少，突变株疏水性降低，胞内cAMP水平降低 了50％左右，对立枯丝核菌的重寄生作用下降。为进一步阐IjfJThgal的功能，本研究开展-jThgal 基因的过表达研究，并对Th．33进行了基因组测序，以及Thgal突变株的转录组测序，结果如下： 1、通过原生质体转化方法获得-]Thgal基因的过表达菌株，过表达菌株菌落形态未发生明显变化， 但产孢量是野生型的1．63倍，生长速度快于野生型，对病原菌拮抗能力增加。 2、采用Hiseq2500高通量测序平台完成了哈茨木霉Th．33的基因组测序，共产生21，579，163条高质 量reads，组装成196个大片段，获得了10849个基因，平均长度为1776bp，CDS平均长度为1528bp， 平均每个基因含有3个外显子，外显子平均长度为540bp，内含子平均长度为95bp，在KEGG数据 库中共注释了6789个基因，在GO数据库共注释了6238个基因。 3、采用lllumina Hiseq2000高通量测序平台完成了哈茨木霉Th．33及敲除突变株1．1的转录组测序， 分别产生2，838，821，746和3，242，007，080条reads。突变株相对野生型Th．33，共有差异表达基因 (DEG)888个，427个上调，461个下调。差异表达基因中，有318个基因被注释到184条KEGG 代谢途径中，其中双酚降解和对氨基苯甲酸甲酯降解代谢途径涉及的差异基因最多，并且以细胞 色素P450家族的编码基因最多。GO富集分析显示，507个差异表达基因分蛰J707个功能亚类，涉 及差异表达基因最多的为催化活性和代谢过程，其中发现大量编码碳水化合物活性酶、次生代谢 物质、分泌蛋白及转录因子的差异表达基因。Kog功能分析显示，463个差异表达基因分至1J23个功 能亚类中，其中次生代谢物的合成、运输及分解代谢过程中差异表达基因最多。为验证转录组测 序的可靠性，我们随机选取16个基因进行实时荧光定量PCR