双对氯苯基二氯乙烯与13一六氯化苯对大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响.PDF

·648· ．论著 双(对氯苯基)二氯乙烯与13一六氯化苯对 大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响 梁先敏胡雅飞 于海歌杨克敌 【摘要l 氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)途径的影响及其作用机制。方法 以不同浓度的P，p-DDE、13-BHC 7· (分别为lO、30、50 P，P p．mol／L)及其联合(10ttmol／LP，p’一DDE+10斗moL／LB-BHC，30斗mol／L DDE+30 p．mol／L B．BHC)处理大鼠睾丸支持细胞24h，设 l山mol／L13-BHC，50 P，p’-DDE+50“mol／L h，再用 Caspase．3抑制剂组(先用100斗moL／LCaspase-3抑制剂Ac—DEVD—CHO处理支持细胞2 50pmol／LP，p-DDE+50p。mol／L13-BHC联合处理)，采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定支持细胞的活 性，吖啶橙／溴化乙锭(AO／EB)双重荧光染色测定支持细胞的凋亡率，RT-PCR法检测Caspase-3、 c∞p∞e-8及Caspase-9mRNA表达量的变化。结果lO、30、50、70trmol／LP，p’．DDE组吸光度(A值) 分别为0．498±O．039、0．481±0．065、0．397土0．032和0．2864-0．049，相同浓度3-BHC组A值分别为 0．518 4-0．103、0．4904-0．060、0．4544-0．054和0．3024-0．030，10、30、50tunol／LP，p’．DDE与B．BHC 联合组A值分别为0．4834-0．048、0．473±0．058和0．3374-0．052，50gmol／L浓度组与对照组比较， A值降低，差异有统计学意义(t值分别为4．599、2．716、6．537，P0．05)。AO／EB双重荧光染色分析 结果显示，lO、30、50i_Lmol／L各染毒组的支持细胞凋亡率明显升高，与溶剂对照组(9．834-0．95)％、 4- caspase-3抑制剂Ac·DEVD-CHO组(15．604-2．74)％比较，P，p-DDE处理组分别为(23．73 2．24)％、(30．034-2．84)％和(38．044-4．98)％，B—BHC处理组分别为(24．424-3．53)％、(30．64± 1．06)％和(39．884-0．17)％，联合处理组分别为(37．084-1．71)％、(42．18±3．32)％和(41．25士 3．36)％。逆转录(RT)一PCR结果表明，C硇pa8e一3、Caspase-8及Casp幽e．9mRNA表达量随着P，P’- DDE、3-BHC及其联合浓度的增加而增加。结论P，P’DDE、B·BHC及其联合作用可通过激活启动 Caspase．8和Casp∞e-9，进而激活下游效应Casp鹄e-3引起支持细胞凋亡。 【关键词】 二氯二苯二氯乙烯； 林丹； 细胞凋亡；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 Effectsof and onthe ofSertoficellsinvitro HANG Ya· P．P’-DDE11-BHC apoptosis Xian．rain，日U and HealthandMoE Environmental ／ei．YUHai．ge．YANGKe．di．DepartmentofOccupational