茎瘤固氮根瘤菌azorhizobium c你aulinodans的重金属耐性机理及其应用.docx

中山大学博士学位论文：茎瘤固氯根瘤菌(Azorhizobium 中山大学博士学位论文：茎瘤固氯根瘤菌(Azorhizobium caulinodnas)的重金属耐性机理及其应用 中山大学博士学位论文 茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans)的重金属耐性机 理及其应用 专业：生态学 博士生：郑政伟 导师：杨中艺教授 中文摘要 彳，caulinodans的重金属耐性是其在重金属污染地上与长喙田菁建立有效共生 固氮关系的前提条件之一。以A cau]inodans、长喙田菁(Sesbania rostrata)为 研究对象，运用电镜、原生质体制备技术、原子吸收技术研究了正caulinodans对重 金属的耐性机理及其对长喙田菁适应重金属污染环境的意义。主要研究结果如下： 1．利用Ⅷ琼脂培养基对A．cau]inodans模式菌株0RS571、突变菌株0RS571一X15、 紫云英根瘤菌菌株及从重金属污染土壤中分离的菌株Gsc-Az020的重金属耐 性进行测试，结果表明，菌株Gsc—Az020和模式菌株0RS571比突变菌株 ORS571-XJ5、紫云英根瘤菌株具有更强的重金属耐性；菌株Gsa-Az020对镉的 耐性高于模式菌株0RS571，菌株Gsc-Az020对Cd的耐性高于许多曾报道的Cd 耐性根瘤菌。 2．爿．caulinodans对重金属的耐性可能是由于脂多糖与重金属流出系统协同 作用的结果。脂多糖构成了正cau]inodans的外层屏障，能阻滞部分的重金 属进入到月．cau]inodans的细胞内：彳．caMinodans中的重金属流出系统 将进入细胞内过量的重金属直接运输到细胞外。在突变菌株0RS571一X15中， 脂多糖的合成量减少及结构特征的改变，导致其外层屏障对重金属的透过性提 高，重金属流出系统的效率下降，最终表现为对重金属的敏感性升高。 3．在缺乏共生宿主的条件下，菌株Gsc—Az020比模式菌株0RS571更能适应高浓 度Cd、zn污染的环境。 4．对生长于cd污染土壤中的长喙田菁接种菌株Gsc—Az020，包括根部接种(RI)、 茎部接种(SI)及根部与茎部同时接种(DI)，均使长喙田菁的全株生物量、 中山大学博士学位论文：茎瘤周氪根瘤菌(Azorhlzobittm 中山大学博士学位论文：茎瘤周氪根瘤菌(Azorhlzobittm caulinodnus)的重金属耐性机理及其应用 全株植物含氮量、株高、根部生物量显著高于未接种处理组(cK)；对生长于 zn污染土壤中的长喙田菁接种菌株Gsc-Az020，RI、DI处理使长喙田菁的全 株生物量、全株含N量、根部生物量显著高于cK组(仄0．05)；SI处理使长喙 田菁的全株生物量、全株植物含氮量显著高于未接种处理组(仄O．05)。 5．在不同浓度的cd胁迫下，RI和DI处理使长喙田菁根中的cd含量比未接种处 理(cK)分别降低20．4—37．4％和25．5-36％，SI处理对长喙田菁根吸收cd无明 显影响，接种处理对长喙田菁茎和叶中的Cd含量无明显影响。在不同浓度的 zn胁迫下，RI、DI和SI处理使长喙田菁根中的zn含量显比未接种处理分别 降低19．7-38％、19．3-37．1％和8—28．4％，茎中的zn含量分别下降了20—50％、 18．2—34％和12．8—38．9％。在不同浓度的cu胁迫下，RI和DI处理使长喙田菁 根中的铜含量比未接种处理(CK)降低了16．1-37％、14．5-36．2；但SI处理对 长喙田菁根吸收cu无明显影响，接种处理对长喙田菁叶和茎中的Cu含量无明 显影响。 6．低浓度的Zn、Cu、Cd胁迫对Gsc-Az020与长喙田菁形成的根瘤和茎瘤亚显微 结构无影响，高浓度cu、cd胁迫对Gsc—Az020与长喙田菁形成的茎瘤的亚显 微结构无影响，但均使根瘤中周膜内的类菌体数目减少；高浓度的zn胁迫均 使Gsc-Az020与长喙田菁形成的茎瘤和根瘤中周膜内的类菌体数目下降。 7．不同浓度的zn、cu、cd胁迫均对Gsc-Az020与长喙田菁形成的根瘤和茎瘤中 的豆血红蛋白含量无明显影响，表明在重金属胁追下，菌株Gsc-Az020均能与 长喙田菁形成有效根瘤和茎瘤。 8．在重金属胁迫下，菌株Gsc-Az020仍能利用色氨酸合成IAA。这也可能是其在 重金属环境中促进长喙田菁的生长的原因之一。 关键词：茎瘤固氮根瘤菌、Cd耐性菌株Gsc—Az020、长喙田菁、脂多糖、流出系统、 IAA、豆血红蛋白、亚显微结构 II 中山大学博士学位论文：茎瘤固氨根瘤菌(Azorhizoblumcaulinodnas)的重金属耐性机理及其应用ADissertatlou 中山大学博士学位论文：茎瘤固氨根瘤菌(Azorhizo