色谱分离条件的择.ppt

2－3色谱分离条件的选择 分高度（resolution） 一个混合物能否为色谱柱所分离，取决于固定相与混合物中各组分分子间的相互作用的大小是否有区别（对气一液色谱）。但在色谱分离过程中各种操作因素的选择是否合适，对于实现分离的可能性也有很大影响。因此在色谱分离过程中，不但要根据所分离的对象选择适当的固定相，使其中各组分有可能被分离，而且还要创造一定的条件，使这种可能性得以实现，并达到最佳的分离效果。 两个组分怎样才算达到完全分离？首先是两组分的色谱峰之间的距离必须相差足够大。若两峰间仅有一定距离，而每一个峰却很宽，致使彼次重叠，如图2－6（a）的情况，则两组分仍无法完全分离，所以第二是峰必须窄。只有同时满足这两个条件时，两组分才能完全分离．如图2－6（b）所示。 为判断相邻两组分在色谱柱中的分离情况，可用分离度R作为色谱柱的分离效能指标。其定义为相邻两组分色谱峰保留值之差与两个组分色谱峰峰底宽度总和之半的比值： 式中tR（2）和tR（1）分别为两组分的保留时间（也可采用调整保留时间），Y1和Y2为相应组分的色谱峰的峰底宽度，与保留值单位相同。R值越大，就意味着相邻两组分分离得越好。两组分保留值的差别，主要决定于固定液的热力学性质；色谱峰的宽窄则反映了色谱过程的动力学因素，柱效能高低。因此，分离度是柱效能、选择性影响因素的总和，故可用其作为色谱柱的总分离效能指标（over-all resolution efficiency） 从理论上可以证明，若峰形对称且满足于正态分布，则当R=1时，分离程度可达 98％；当 R=1.5时，分离程度可达 99.7％。因而可用 R＝ 1.5来作为相邻两峰已完全分开的标志。 当两组分的色谱峰分离较差，峰底宽度难于测量时，可用半峰宽代替峰底宽度，并用下式表示分离度 ： 与R的物理意义是一致的，但数值不同， R＝ 0.59R’，应用时要注意所采用分离度的计算方法。 色谱分离基本方程式 色谱分析中，对于多组分混合物的分离分析，在选择合适的固定相及实验条件时，主要针对其中难分离物质对来进行，这就是说要抓主要矛盾。对于难分离物质对，由于它们的保留值差别小，可合理地认为 Y1=Y2=Y，k1≈k2=k。由下式得： 可推出 由上边公式及 tR = tM(1+k) 整理后得到： 上式称色谱分离基本方程式，它表明R随体系的热力学性质（a和k）的改变而变化，也与色谱柱条件(n改变）有关。 tR = tM(1+k) 若将上式并将式整理可得n与n有效（有效理论塔板数）的关系式及用有效理论塔板数表示的色谱分离基本方程式 1分离度与柱效的关系（往效因子） 分离度与n的平方根成正比。当固定相确定，亦即被分离物质对的α确定后，欲使达到一定的分离度，将取决于n。增加征长可改进分离度，但增加柱长使各组分的保留时间增长，延长了分析时间并使峰产生扩展，因此在达到一定的分离度条件下应使用短一些的色谱枉。除增加枉长外，增加n值的另一办法是减小柱的H值，这意味着应制备一根性能优良的柱子，并在最优化条件下进行操作 2．分离度与容量比的关系（容量因子） k值大一些对分离有利，但并非越大越有利。观察表2－2数据，可见是k＞10时，k／（k十 1）的改变不大，对 R的改进不明显，反而使分析时间大为延长。因此是值的最佳范围是1＜k＜ 10，在此范围内，既可得到大的 R值，亦可使分析时间不至过长。使峰的扩展不会太严重而对检测发生影响。 使k改变的方法有：改变柱温和改变相比。前者会影响分配系数而使k改变；改变相比包括改变固定相量VS及柱的死体积VM。其中VM影响k／（1十k），当组分的保留值较大而 VM又相当小时，k／（1十k）随 VM增加而急剧下降，导致达到相同的分离度所需n值大为增加。由此可见，使用死体积大的柱子，分离度要受到大的损失。采用细颗粒固定相，填充得紧密而均匀，可使柱死体积降低。 3．分离度与往选择性的关系（选择因子） α是柱选择性的量废，α越大，柱选择性越好，分离效果越好。在实际工作中，可由一定的α值和所要求的分离度，用式 计算柱子所需的有效理论塔板数。表2－3列出了根据式计算得到的一些结果。这些结果表明，分离度从1.0增加至1.5，对应于各α值所需的有效理论塔板数大致增加一倍。从表2－3还可看出，在一定的分离度下，