奶牛源性双歧杆菌和乳杆菌的分离鉴定及耐药性研究-基础兽医学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘 摘 要 为了筛选性能优良且对机体有益的耐药性双歧杆菌和乳杆菌，扩大双歧杆菌、 乳杆菌的应用范围，本研究采用乳酸菌鉴别培养基和微生物厌氧培养技术从呼和浩 特地区两个牧场25头乳犊牛粪便中分离到49株双歧杆菌属和乳杆菌属的细菌，并 采用纸片法对分离菌进行了药物敏感性试验。结果显示：49株菌对所选12种抗菌 药均有不同程度的耐性，其中，49株菌全部对甲硝唑耐药；45株菌对氨基糖苷类 耐药；37株菌对喹喏酮类耐药；对四环素类、氯霉素类、红霉素类的耐药菌株分别 为：10株、10株和19株。 对其中7株耐药性较强的菌株进行形态、生理生化特性鉴定及16SrRNA序列分 析，证明7株菌为：3株植物乳杆菌、2株链双歧杆菌、2株豚双歧杆菌。 采用试管二倍稀释法及杯碟法对这7株耐药菌进一步进行试验后发现，7株菌 对12种抗菌药同时具有不同程度的耐药性。其中，3株植物乳杆菌除l株菌对四环 素、左氧氟沙星中度敏感外，对其它抗菌药均有耐药性；2株豚双歧杆菌中除l株 茵对氯霉素中度敏感外，对其它抗菌药均有耐药性：2株链双歧杆菌除对四环素中 度敏感、其中l株对氨苄西林敏感外，对其它抗菌药均有耐药性。试验菌株均对甲 硝唑和氨基糖苷类抗菌药表现出较为一致的耐性。 在对7株菌进行喹喏酮类耐药机制的研究时发现，采用琼脂凝胶电泳技术检测 其质粒，7株菌内均未提取出质粒；采用荧光分光光度法，用2，4一二硝基酚作为 抑制剂证明6株菌内存在药物主动外排系统寸采用PCR技术和gyrA的QRDR序列分 析表明，试验菌株有DNA旋转酶gyrA基因的突变。 结论：从未使用过抗菌药的乳犊牛粪便中分离到49株双歧杆菌和乳杆菌属的 菌株，这些菌株对12种抗菌药均有不同程度的耐药性，其中对甲硝唑的耐药率达 到100％；对氨基糖苷类的耐药率达87．8％以上；对四环素类、氯霉素类、红霉素类 的耐药率在20．4％-38．8％之间：对喹喏酮类的耐药率在70％以上。对喹喏酮类药物 产生耐药与质粒介导无关，而与其存在主动外排系统以及DNA旋转酶gyrA基因突 变有关。 关键词：奶牛源性；双歧杆菌：乳杆菌；分离鉴定：耐药性 Isolations Isolations and Identifications of the Bifidobacterium and Lactobacillus from Cows and Their Resistance Characteristics to ’Given Antibacterial Drugs Abstrcat To screen the beneficial Bifidobacterium and Lactobacillus with high performance and drug resistance，widen the range and mode of its utilization，the isolation，identification，bionomies and resisitance of Bifidobacterium and Lactobacillus strains isolated from feces of COWS in Huhhot were studied． The 49 strains of Bifitobacteria and Lactobacilli from the fresh feces of calf never used antimicrobials were isolated and its drug resistance research were carried out．The morphological，physiological，biochemical characteristics and identification of multiple PCR and 1 6SrRNA sequence analysis of 7 strains with higher drug resistance of 49 strains were studied， the results showed that 3 strains belong to Lactobacillus plantarum，2 strains belong to Bifidobacterium choleyium and 2 strains belonged to 8／f／dobacterium catemulatum． The K．B method was adopted to determine the drug resistance of these 49 strains，the resu