大肠杆菌半乳糖结合凝集素的提取纯化.PDFVIP

第７卷第４期 生　物　加　工　过　程 Ｖｏｌ．７Ｎｏ．４ ２００９年７月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｕｌｙ２００９ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１７６２－３６７８．２００９．０４．００６ 大肠杆菌半乳糖结合凝集素的提取纯化 贾　楠，殷海波，李琳子，李任强 （暨南大学　生物工程学系，广州５１０６３２） 摘　要：采用琼脂糖凝胶ＣＬ ６Ｂ（ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ）亲和层析以及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶分子筛等对大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅ ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，Ｅ．ｃｏｌｉ）半乳糖凝集素进行了纯化。结果显示，目标蛋白经简单的步骤即可以得到纯化，十二烷基硫酸 钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）及凝血实验证明纯化蛋白为Ｅ．ｃｏｌｉ半乳糖凝集素，蛋白提取回收率为 １１４％。研究首次从Ｅ．ｃｏｌｉ蛋白提取液中分离得到纯的半乳糖凝集素，且此方法简单快捷，优越性明显。应用此 方法将有利于微生物半乳糖凝集素的深入研究。 关键词：Ｅ．ｃｏｌｉ；半乳糖结合；凝集素；分离 中图分类号：Ｑ５１３　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－３６７８（２００９）０４－００２８－０４ ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇａｌａｃｔｏｓｅｂｉｎｄｉｎｇｌｅｃｔｉｎｆｒｏｍＥ．ｃｏｌｉ ＪＩＡＮａｎ，ＹＩＮＨａｉｂｏ，ＬＩＬｉｎｚｉ，ＬＩＲｅｎｑｉａｎｇ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ６ＢａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５ｇｅｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏ ｓｅｐａｒａｔｅｔｈｅｇａｌａｔｏｓｅｂｉｎｄｉｎｇｌｅｃｔｉｎｆｒｏｍＥ．ｃｏｌｉ．Ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ ｓｉｓａｎｄｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｂｔａｉｎｅｄｐｒｏｔｅｉｎｐｏｓｓｅｓｓｅｄｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｈｅ ｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓＥ．ｃｏｌｉｇａｌａｔｏｓｅｂｉｎｄｉｎｇｌｅｃｔｉｎ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ１１４％． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｅ．ｃｏｌｉ；ｇａｌａｔｏｓｅｂｉｎｄｉｎｇ；ｌｅｃｔｉｎｓ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ［６］ 　　凝集素存在于整个自然界中，是一类糖结合蛋 半乳糖苷键的惰性物质 ，是由普通的分子筛填料 白，包括植物凝集素、动物凝集素和微生物凝集素 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ和二溴丙醇或环氧氯丙烷反应而成， （ｍｉｃｒｏｂｉａｌｌｅｃｔｉｎｓ，ＭＬ）。１９０８年，Ｇｕｇｏｔ最先在大肠 具有较强的物理和化学稳定性，可以承受较高的柱 杆菌中找到了能凝集血细胞的凝集素，迄今为止已 压。因此本研究尝试采用ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ ６Ｂ亲和层 ［１］ 析来分离Ｅ．ｃｏｌｉ半乳糖结合凝集素。 发现约２０８种 ＭＬ 。ＭＬ在生命活动中具有重要 的作用［２－３］。 １　材料与方法 目前的研究大多针对动物或植物中凝集素的 提取和纯化，而对微生物凝集素的提取方法很有 １．１　试剂与仪器 限，之前也并未有研究尝试提取Ｅ．ｃｏｌｉ半乳糖结合 ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ ６Ｂ填料Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司，低相对 凝集素的报道