抗纤i号方药抗实验性大鼠肝纤维化作用及其分子机没制分析.docx

中文摘要抗纤I号方药抗实验性大鼠肝纤维化作用及其分子机制研究 中文摘要 抗纤I号方药抗实验性大鼠肝纤维化作用及其分子机制研究 摘 要 肝纤维化为诸多慢性肝病发展至肝硬化过程中所共有的病理组织 学变化，是影响慢性肝病预后的重要环节，在尚无有效方法根治原发疾 病的情况下，减缓或阻止肝纤维化进程是相当重要的治疗对策。 在我国，病毒性肝炎、血吸虫病和酒精性肝病是弓【起慢性肝病的 三大主要病因。根据1992年全国病毒性肝炎血清流行病学调查，我国 人群中HBsAg阳性率平均为9。75％，约为l亿2千万人，占世界HBV 感染人数的1／3。其中慢性肝炎患者约有3千万人，这些患者均有可能 或已经发展为肝纤维化。因此|j千纤维化的群体是十分巨大的，所以寻找 治疗肝纤维化的有效方法是十分迫切的和必要的。 肝纤维化的基本病理改变为细胞外基质(Ec碡)在肝内过度沉积， I、III、IV型胶原大量积聚，广泛分布于肝间质；主要病理特征为汇 管区肝纤维组织增多，形成细小的纤维条索与菲薄的纤维间隔，其主 要发生机制为胶原合成、沉积与降解和吸收的动态平衡的破坏，即当 胶原合成与沉积大于降解和吸收时，肝内胶原纤维逐渐增加而形肝纤 维化。中医并无肝纤维化～词，从中医临床考查，慢性肝病主要包括 在“黄痘”“胁痛”“瘀血”“症积”等范围内．其中“瘀血”和“症积”， 同肝纤维化的关系最密切。 目前对肝纤维化机制的研究已逐渐深入，当各种不同的病因(如病 毒、乙醇、寄生虫、铜、铁沉积等)引起枯否氏细胞激活，分泌多种因 子，与某些化学介质共同作用于肝星状细胞(hepatic stellete cells，HSC)， 使其激活转化为肌纤维细胞(myofibroblaster,MFB)，通过旁分泌与自分 泌作用，使HSC增殖，合成大量的细胞外基质(extra cellular matrix， ECM)，ECM的分泌增加或降解减少，以致其在_|}于内大量沉积恧形成肝纤 维化。若进一步发展引起肝小叶改建、假小叶和结节形成，则进入肝硬 化，而肝纤维化是可逆转性改变，肝硬化则不可逆转。近年来随着对肝 纤维化的发病机理的深入研究，对其认识不断提高，同时亦为在不同阶 段阻断纤维化进程提供了理论基础。 中文摘要在治疗方面，目前西医治疗肝纤维化尚无具有特异性疗效的方法， 中文摘要 在治疗方面，目前西医治疗肝纤维化尚无具有特异性疗效的方法， 而中药却在治疗肝纤维化上表现出独特的优势，本抗纤I号由丹参、 莪术、当归、鳖甲等成份组成，具有活血化淤、消炎解毒、软坚散结 的作用。在临床的使用上表现出明确的疗效，能够改善症状，减轻体 征，是一个有前途的中药复方制剂。本实验用CCl。建立肝纤维化动物 模型，研究活血化淤中药抗纤I号治疗大鼠实验性肝纤维化分子机制， 为中药治疗肝纤维化提供理论依据，同时用荧光标记mRNA差异显示技 术(DD—PCR)筛选肝纤维化相关基因。 实验内容主要包括以下五部分： 1抗纤I号方药对实验性大鼠肝纤维化血清学及组织学影响 目的：通过抗纤I号对大鼠实验性肝纤维化血清学及病理学研究， 确证该方药对肝纤维化的疗效，为后续实验奠定基础。 方法：实验动物分组及肝纤维化模型的建立：Wister大鼠，随机 分为四组，每组10只，雌雄各半，四组分别为：正常对照组(Contr01)、 肝纤维化模型组(HF+H。0)、抗纤I号中药治疗组(HF+AHF—1)和秋水仙碱 治疗组(HF+C01)，模型的建立按本研究室常规方法，除对照组以外各 组实验开始第一天皮下注射40％CCl。植物油O．5ml／1009体重，以后每 隔四天皮下注射40％植物油溶液0．3ml／1009体重，共注射13次，同时 饲以高胆固醇饮食(79．5％单纯玉米粉加20．5％猪油、O．5％胆固醇制成 的混合饲料)，另以30％乙醇为饮料饲养动物。抗纤1号为中药复方， 主要由丹参、当归、莪术、三棱、鳖甲等组成，水煮醇提，于造模成 功后，给药组给予中药(2．5mg／m1)0．5ml／1009灌胃，共42天，对照组、 模型组给予同等量蒸馏水灌胃，秋水仙碱组给予12．5斗g／1009灌胃。 实验结束上腔静脉放血处死动物，留取动物血液和肝脏标本，利用全 自动生化分析仪检测血清学指标：丙氨酸氨基转换酶(ALT)、放射免 疫分析法检测肝纤维化指标：透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)。计算 肝脏／体重比值，肝组织标本HE、Masson染色，做病理观察。实验结 果用统计学方法处理：计量资料的比较用方差分析，等级资料比较用 秩和检验。 结果：大鼠一般情况：从食欲、体毛、是否易激惹及活动度等几 方面观察，由好及差的顺序为正常对照组、中药治疗组、秋水仙碱组、 中文摘要和模型组。肝／体重比值模型组为6．】2±0．32、秋水仙碱组为4．46± 中文摘要 和模型组。肝／体