工业微生物菌种选育及保藏.pptVIP

1、链霉菌属，是产生抗生素最多的一个属 链霉素 灰色链霉菌 红霉素 红色链霉菌 四环素 金色链霉菌 2、小单孢菌 庆大霉素 由绛红小单孢菌和棘孢小单孢菌产生。 第二节 菌种的衰退、复壮与保藏 菌种退化是指经较长时间传代保藏后，菌株的一个或多个生理性状和形态特征逐渐减退或消失的现象。 2 防止菌种衰退的措施 二 、 菌种的复壮 三、菌种保藏（strain preservation） 出发菌株（parent strain）选择应考虑的问题 3．取2～4m1制备的菌液加到直径9cm培养皿内，放入一无菌磁力搅拌子，然后置磁力搅拌器上、15W紫外线下30cm处。在正式照射前，应先开紫外线10min，让紫外灯预热，然后开启皿盖正式在搅拌下照射10～50s。操作均应在红灯下进行，或用黑纸包住，避免白炽光。 4．取未照射的制备菌液和照射菌液各0.5ml进行稀释分离，计数活菌细胞数。 5．取照射菌液2ml于液体培养基中(300ml三角瓶内装30ml培养液)，120r／min振荡培养4～6h。 6．取中间培养液稀释分离、培养。 7．挑取菌落进行筛选。 2氮芥盐酸盐溶液的配制：所有用品灭菌、烘干，取约10mg氮芥盐酸盐放入一小瓶，加入蒸馏水2ml，加盖橡皮塞即可。 3吸取1ml孢子悬液（200万孢子/ml）加入一灭菌小瓶，加入0.6ml缓冲液，再加入0.4ml氮芥溶液，加盖橡皮塞，摇匀，此时氮芥作用浓度1mg/ml. 4加氮芥溶液30s后计时，到时间后，取0.1ml作用液加入9.9ml解毒液中，使停止作用。 (二)操作步骤 1．单孢子悬液制备 取斜面，加入6ml 0.1mol／L pH6.o的磷酸缓冲液，用接种环刮下孢子，振荡试管，立即通过带滤纸漏斗过滤，由此制得单孢子悬液，若孢子液浑浊状，其孢子浓度可达l06个／ml，此为待处理孢子悬液。 2．MNNG溶液的制备 用分析天平称取2mg，加入2ml 0.1mol／L pH 6.0磷酸缓冲液，于暗处振荡溶解。 3．诱变处理 吸取MNNG溶液lml，加入到1m1孢子悬液中，30℃振荡30min，立即稀释1000倍停止作用，然后以10-2，10-4两个稀释度分离培养，30℃ 3天后计数。 4．死亡率计算 将未处理的孢子液1ml加入1ml磷酸缓冲液中，同上逐级稀释分离， 30℃下培养3天。根据处理前后的活孢子数可计算出死亡率。 5．挑取菌落进行糖化酶及蛋白酶产量筛选 ? 高通量筛选 诱变育种的几个概念 第四节 生产菌株的改良 三、DNA重组技术(分子生物学) 工业生产中微生物育种的基本方法包括自然选育、诱变育种、抗性菌种选育、代谢控制育种及基因重组定向育种等。 育种就是要改善菌种的特性，使之能提高产量、改进质量、降低成本、改进工艺、方便管理及综合利用等。 　 代谢控制育种主要有两个方面： 改变代谢通路的育种 改变代谢自动调节系统的育种 第三节 菌种的选育 一、自然选育 采样 增殖培养 从自然界选育菌株 纯种分离 性能鉴定 从自发突变中选育菌株 二、诱变育种 按照生产的要求，根据生物的遗传和变异的理论，用人工的方法造成菌种变异，再经过筛选、而达到菌种诱变选育的目的。 诱变育种一般采用物理、化学诱变剂使微生物DNA的碱基排列发生变化，以使排列错误的DNA模板形成异常的遗转信息，造成某些蛋白结构变异，而使细胞功能发生改变。 原种（出发菌株）?纯化?斜面培养?完全培养基同步培养?离心洗涤?玻璃珠震荡分散?过滤?单细胞或孢子悬浮液 　　　　　　 ? 活菌计数 　　　　诱变处理 ? 诱变处理预备实验　 　　　　　　 ? 处理液活菌计数 　　　　平板分离 　　　　　 　? 形态变异并计算其变异率　 　　　　斜面培养