原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
查看更多
重组弹性蛋白酶诱导表达纯化及酶学特性研究-食品科学
※生物工程 食品科学 2009, Vol. 30, No. 19 22 7
重组弹性蛋白酶诱导表达、纯化及酶学特性研究
1 2 2 2 2 2 1 , 2 ,
谷新晰 ，许文涛 ，黄昆仑 ，罗云波 ，林希谨 ，陈卓君 ，田洪涛 *
(1.河北农业大学食品科技学院，河北保定 07 100 1；2 . 中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083)
摘 要：将已构建好的表达载体pPIC3.5K/PAE 转化毕赤酵母KM7 1，经甲醇诱导表达弹性蛋白酶，通过对发酵条
件的初步优化，确定毕赤酵母重组菌株表达的最佳条件为：甲醇浓度1% ，最佳诱导时间4d 。通过DEAE-Sepharose
FF 弱阴离子交换柱一步纯化，获得良好的纯化效果。该重组蛋白酶最适pH 值范围6.0～8.5 ，最适温度范围为25～
4 0 ℃，催化反应条件温和。C a2 + 和M g 2 + 对重组弹性蛋白酶活性有不同程度的促进作用，Z n 2 + 、C d 2 + 、Mn 2 + 、
F e2+ 、C o2 + 、Cu 2 + 和E DTA 对该酶有不同程度的抑制作用。
关键词：弹性蛋白酶；诱导表达；纯化；酶学特性
Expression, Purification and Enzymological Properties of Recombinant Elastase
1 2 2 2 2 2 1,2,
GU Xin-x i ，XU Wen -tao ，HUAN G Kun-lun ，LU O Yun-b o ，LIN Xi-j in ，CHEN Zhuo-j un ，TIAN Hong-tao *
(1. College of Food Science and Technology, Hebei Agricultural University, Baoding 07 100 1, China ；
2. College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beij ing 100083, China)
Abstract ：Elastase was expressed in Pichia p astoris KM7 with the transformation of a recombinant plasmid pPIC3.5K/PAE
encoding a full-length lasB gene of PAE (Pseudomonas aeruginosa elastase) under the induction of methanol. The optimal
expression conditions were 1% methanol and 4 d induction . The best purification efficiency was achieved through DEAE-
Sepharose FF anion exchange chromatography. The optimal pH and temperature range for catalytic reaction of this elastase were
6.0－8.5 and 25－40 ℃, respectively. Its activity was revealed an enhancement effect from Ca2+ and Mg2+, and an inhibition effect
from Zn2+, Cd2+, Mn2+ , Fe2+
文档评论（0）