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酶联免疫吸附法
（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA
ELISA 的发展
50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射性免疫
（RIA）分析技术之后，70年代初又建立了用酶来
标记抗原或抗体的分析技术
1971年此项技术由瑞典学者 Engvall 和Perlmann，
荷兰学者Van Weeman和 Schuurs分别报道，将免
疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测
定方法，称为酶联免疫吸附测定法（ELISA
ELISA基本 原理
使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性
使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗
体既保留其免疫活性，又保留酶的活性
结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加
入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本
中受检物质的量直接相关
在ELISA方法中有三个必要的试剂 ：
（1 ）固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂”
（immunosorbent ）
（2 ）酶标记的抗原或抗体，称为“结合物”
（conjugate ）
（3 ）酶反应的底物
用于临床检验的ELISA主要有以下几种类
双抗体夹心法测抗原（常用）
夹心法
双抗原夹心法测抗体 （几乎不用）
间接法测抗体（常用）
竞争法测抗原
竞争法
竞争法测抗体
捕获包被法测抗体
亲和素-生物素 ELISA法 （放大信号作用）
包被特异性抗体
（已固定
双
抗
体 加入待测样品
夹
心
孵育 洗涤
法
测
加酶标特异性抗体
抗 孵育 洗涤
原
底物显色
酶联免疫吸附法 基本工作原理是：利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗
体分别与样品中被检测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形
成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。复合物的形成量与
待测抗原的含量成正比。测定复合物中的酶作用于加入的底
物后生成的有色物 质量(OD值) ，即可确定待测抗原含量。
酶标仪450nm波长 OD值 根据校准品浓度对应的
或双波长450/630nm OD值，使用双对数线
拟合方式 log （x -log
加终液50ul （Y ）计算结果
=concentr
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