穿膜肽引导核酸靶向性进入神经细胞的研究.PDFVIP

·３２６· 中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１４Ｍａｒ；３０（３）：３２６～３０ 网络出版时间：２０１４－２－２４１３：４３　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１３４３．００８．ｈｔｍｌ ◇论　　著◇ 穿膜肽引导核酸靶向性进入神经细胞的研究 高飞燕，张苗苗，徐兴然，吴　静，张恩齐，付爱玲 （西南大学药学院，重庆　４００７１６） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１４．０３．００８ 药物维持时间短、表达效率低，且不利于在人体上应 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１４）０３－０３２６－０５ 用［４－５］。 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ３４１．６；Ｒ３４２．３；Ｒ３９４．２；Ｒ４５９９ 基因治疗的关键在于所使用的载体。基因治疗 摘要：目的　研究来源于狂犬病毒糖蛋白的一个新型衍生肽 ［６］ 的载体通常包括病毒 和非病毒载体，与病毒载体 （ＲＶＧｄｅｒｉｖｅｄｐｅｐｔｉｄｅ，ＲＤＰ），是否能够引导ＤＮＡ特异性地 相比，非病毒载体具有明显优势。多肽作为一种非 进入神经细胞。方法　首先，通过琼脂糖凝胶电泳阻滞实验 病毒载体，具有生物可降解性、生物相容性、低毒性、 和圆二色谱确定 ＲＤＰ与ＤＮＡ复合物的最佳比例以及相互 作用，将最佳比例的复合物转染入神经母瘤细胞；其次，将 易于合成等优点，避免了使用病毒载体等传统方法 ＲＤＰ包裹的ＤＮＡ复合物（ＲＤＰ／ｐＤＮＡ）通过静脉给药的方式 的毒性和免疫原性，在治疗ＣＮＳ疾病中展现出了良 给予小鼠，组织冷冻切片检测 ＤＮＡ在各组织的表达情况。 好的应用前景。目前已有文献报道利用一些富含精 结果　体外试验结果表明，目的基因仅在神经细胞中表达； 氨酸的多肽［７－９］，如（ＲＸＲＲＢＲ）２ＸＢ和ＰＰＴＧ，在体 体内试验结果表明，ＲＤＰ／ｐＤＮＡ组小鼠的脑、肾、肝可检测到 内成功介导了ＤＮＡ、反义寡核苷酸或ｓｉＲＮＡ进入细 目的蛋白，其中脑内目的蛋白含量最高。结论　ＲＤＰ可作为 胞并发挥作用。 一种靶向神经细胞的基因载体，在未来的非病毒载体应用 我们实验组前期的研究表明，来源于狂犬病毒 中可能具有较大的潜力。 糖蛋白的一个新型衍生肽（ＲＶＧｄｅｒｉｖｅｄｐｅｐｔｉｄｅ， ＲＤＰ），可以携带外源蛋白质特异性的进入中枢神经 关键词：穿膜肽；ＲＤＰ；基因治疗；细胞转染；凝胶阻滞；靶脑 细胞。我们通过基因工程技术制备出ＲＤＰＧａｌ融 β 转运 合蛋白，小鼠尾静脉注射该融合蛋白后，各组织切片 结果显示，该融合蛋白分布于整个脑部，而在外周组 　　血 －脑屏障（ｂｌｏｏｄｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒ，ＢＢＢ）能够阻 织几乎没有分布［１０］。由此，本研究对 ＲＤＰ作为载 挡几乎所有的大分子和超过９８％的小分子药物的 体介导ＤＮＡ进入神经细胞的可行性进行探究。以 入脑转运，从而阻碍了中枢神经系统（ｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖ ［１－２］ 增强型绿色荧光蛋白（ｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅ