含质粒复制起始区ori44的苏云金芽胞杆菌解离载体的构建-微生物学报.PDF

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( * # 年 月 $%%$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-. $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 含质粒复制起始区!# !! 的苏云金芽胞杆菌解离载体的构建 吴 岚 孙 明 朱晨光 张 蕾 喻子牛 （华中农业大学生命科学技术学院农业微生物农业部重点实验室，武汉 0#%%5% ） 摘 要 将苏云金芽胞杆菌转座子 的解离酶识别位点 分别插入克隆载体 和 得到质粒 6?00#% *% EFG:6 H EIJ!4 和 。这两个质粒分别经 和 双酶切回收含 位点的小 片段， EH,H!$%! EH,H!$%$ .+3KLM 4#$C ! 50( FLM 4#$C ! *% N+3 与穿梭载体EK6#!%! 经 50( FLM 4#$C !双酶切后回收的含大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因和红霉素抗性 基因的 片段连接，获得重组质粒 。封闭 两 位点外的 和 位点后，得到解 # 2#OP EH,H!$%# EH,H!$%# *% .+3KL 50( FL 离载体EH,H!$%0 。将来源于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种QH6/!$% 的质粒复制起始区(*#00 片段插入EH,H!$%0 的两 位点之间，得到解离穿梭载体 。该解离载体插入壮观霉素抗性基因后电转化无晶体突变株，在 *% EH,H!$% 辅助质粒所提供的解离酶作用下可发生解离消除抗性基因，解离频率为!%% R ，解离后的质粒稳定性为4#R 。利用 解离穿梭载体EH,H!$% 可在用抗性筛选到转化子后特定消除抗性标记基因和其它非苏云金芽胞杆菌N+3 片段。 关键词 苏云金芽胞杆菌，解离载体，质粒复制起始区 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） S5$ 3 !%%%/#%1! $%%$ %#/%##/%0 苏云金芽胞杆菌（ ， ）在芽 另一个含 质粒复制区的质粒则只能在 .+0#,,) /)*#$1#%$# HT J():! 5 * 0(,# ［］ 胞形成期合成的杀虫晶体蛋白（ 中存活 。本研究利用这一思路构建了一种可普遍 U7=TDC-) DV.=T-) EV(/ T7?=）对多种农业害虫具有杀虫活性，其制剂是目前 通用且方便插入不同基因的质粒载体。 研究最广泛、最深入的细菌杀虫剂，占当前生物杀虫 ［］