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肿瘤干细胞 高全立 河南省肿瘤医院生物治疗科 干 细 胞 生 物 学 特 性 干细胞有自我复制更新能力：通常情况下只有干细胞具有分裂产生子代干细胞的能力 干细胞有定向分化为功能细胞能力 已经定向分化的细胞一般情况下不能逆转化为干细胞 干细胞分类 根据来源分类 胚胎干细胞 成体干细胞 根据分化潜能分类： 全能干细胞 多能干细胞 单能干细胞 胚胎干细胞培育过程 干细胞的再编程 核移植 如克隆羊多莉 细胞融合 基因转染：iPS OCT4, SOX2, KLF4, c-MYC 小分子化合物诱导： 多能干细胞多向分化图 横向分化 亚全能干细胞？ 肿瘤的异质性—肿瘤干细胞 肿瘤干细胞的起源 由正常干细胞经多基因多步骤突变累积而来 由骨髓来源的干细胞与基因发生改变的组织细胞融合而来 由基因发生改变已分化的细胞逆转化而来 Cancer stem cells should be the therapy target 肿瘤干细胞的特性 维持肿瘤生长的基础 具有自我更新和多向分化的能力 肿瘤组织中含量极低 对常用的治疗方法耐药：如化疗、放疗、分子靶向治疗。免疫治疗如何？ ABC转运蛋白在肿瘤干细胞多药耐药中的作用 肿瘤干细胞的可变性 易于转化为间质样细胞，表达许多成纤维细胞的特性 非肿瘤干细胞可通过EMT转变为肿瘤干细胞 EMT-表皮细胞向间质细胞转化MET-间质细胞向表皮细胞转化 肿瘤干细胞的间质细胞学特性 EMT（表皮细胞向间质细胞转化）是肿瘤侵袭和转移的主要机制之一，肿瘤干细胞易于侵袭和转移。 多个实验证实肿瘤干细胞具有间质细胞的生物学特性。 乳腺上皮细胞系通过EMT可产生乳腺癌干细胞。 肿瘤干细胞的表面分子标记 CD44：乳腺癌，头颈部鳞癌，胰腺癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌， 大肠癌 CD133：脑胶质瘤，大肠癌，胰腺癌，肺癌，肝癌，恶性黑色素瘤，卵 巢癌 CD90：肝癌，肺癌 CD24：胰腺癌阳性，乳腺癌阴性 CD117：卵巢癌 CD278：恶性黑色素瘤 肿瘤干细胞表面标记与预后 CD44：头颈部鳞癌的预后不良标记。乳腺癌中12个研究中的898例meta分析，CD44为预后不良的标记。大肠癌中存在争议。 CD133：脑胶质瘤高表达预后差。大肠癌高表达预后差，肺癌有争议。外周血CD133 mRNA的表达水平与预后相关（J Clin Oncol, 2011 29(12):1547-55). 肿瘤干细胞高表达胚胎干细胞相关基因 Oct4 Sox2 NANOG Klf Bmi1 C-Myc 胚胎干细胞基因与肿瘤预后的关系 Oct4：肺癌及乳腺癌中高表达分化差，预后差 Sox2：口腔鳞癌、食管癌高表达预后差，而肺鳞癌中高表达预后良好的指标。 NANOG：口腔鳞癌中高表达预后差，大肠癌中的表达与预后无关。 c-Myc：与多种肿瘤的预后不良相关。 EMT相关基因与肿瘤的预后的关系 E-cadherin N-cadherin Vimentin 尽管存在争议，一些文章支持与肿瘤的预后相关 肿瘤干细胞其它功能基因与预后 ALDH1（乙醛脱氢酶1）：ALDEFLUOR的试剂来分选ALDH-1阳性细胞。其表达与多种肿瘤的预后明显相关。 ABC转运子家族蛋白：MDR1，ABCG2，ABCB5等，其功能与SP细胞相关。其表达于预后的关系不明确。 肿瘤干细胞是否存在的争议 正常组织的干细胞所占比例很低，而某些肿瘤含有很高比例的肿瘤干细胞。 非肿瘤干细胞很容易通过EMT转变为肿瘤干细胞。 免疫标记技术 抗原抗体反应 免疫组化技术 基本原理 常用酶标抗体间接法 免疫组化的优缺点 优点：特异性 敏感性 定位性 缺点：假阳性率高 设计好对照是关键：阴性对照、阳性对照、自身对照 免疫荧光基本原理 流式细胞仪的工作原理 流式细胞仪 流式细胞仪的应用 细胞生物学 肿瘤些 免疫学 血液学 药物学 流式细胞结果分析（散点图） 流式细胞分析 肺癌干细胞的分离鉴定 原代培养建立的肺癌细胞系 We have established 5 squa