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电化学发光免疫分析法 Electro-Chemiluminescence Immunoassay (ECLI) 免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法 免疫分析法 它是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种技术手段。 抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发生的特异性反应，它既可以发生在体内，也可以发生在体外。 免疫标记技术是将一些既容易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质或含量。 免疫学检测的发展阶段 免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应 进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、 酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显 示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。 我国免疫学的检测基本历经了以下几个过程: 中国免疫学检测的历史演进 放射免疫检测：兴于20世纪70年代，现在已经基本淘汰，可能有些小医院还在使用。 酶联免疫检测：兴于20世纪80年代，现普遍使用于各级临床机构，为我国临床免疫诊断的基本方法。 以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术，始于20世纪90年代，现广泛应用于县级以上各医疗机构，产品已经步入成熟期。 按示踪物及标记种类分 放射免疫技术 荧光免疫技术 酶免疫技术 化学发光免疫技术 金免疫技术 匀相免疫测定 非匀相免疫测定 发 光 的 分 类 光照发光：发光剂经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。 生物发光：反应底物在荧光素酶的催化下利用ATP产能，生成激发态的氧化荧光素，后者在回复到基态时多余的能量以光子的形式放出。 化学发光：在常温下由化学反应产生的光的发射，化学发光是一个多步骤的过程。 在自然界有各种各样的发光现象 化 学 发 光Chemiluminescence （CL） 化学发光是指在某些特殊的化学反应中，反应的中间体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。 化学发光分析----根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，成为化学发光分析。 化学发光免疫分析----是集灵敏的化学发光技术和特异的抗原抗体免疫测定于一体的检测技术。 化学发光免疫分析的特点：灵敏度高、特异性高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化。 化学发光免疫技术的类型 按发光剂不同分为 发光酶免疫测定（Chemiluminescence enzyme immunpassay CLEIA） 化学发光免疫测定技术（Chemiluminescence immunoassay CLIA） 电化学发光免疫测定技术（Electrocheminluminescence immunoassay ECLI） 按分离方法不同分 微离子化学发光免疫测定 磁颗粒化学发光免疫测定 化学发光剂 机制 某些化合物可以利用化学反应产生能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激发态，当此产物分子或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量（即发光）。 化学发光剂或发光底物 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物。 发光剂分为荧光素、生物发光剂和化学发光剂。 化学发光剂应符合以下几个条件 能参与化学反应； 与抗原或抗体偶联后成稳定的结合物试剂； 偶联后仍保留高的量子效应和反应动力； 应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫 活性。 1,酶促反应的发光底物 是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物 CLEIA中常用的酶有HRP和AP HRP的发光底物有鲁米诺、对一羟基苯乙酸 AP的发光底物有AMPPD、4—MUP（荧光底物） 特点：可做标记物，也可以做过氧化物酶的底物 HPA在H2O2存在下被ＨPR氧化成氧化二聚体（荧光物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长的荧光，可用荧光光度计计量。 原理 属于酶免疫测定的一种，只是最后一步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。 技术类型 根据酶促反应所用底物不同可分为： 1 荧光酶免疫测定技术 2 化学发光酶免疫测定技术 根据免疫学反应模式分 1 双抗体夹心法和双抗原夹心法 2 固相抗原竞争法 抗原抗体结合反应 将已包被了抗体的乳胶颗粒和待测标本加入反应杯中，经温育一定时间后，再加入AP标记抗体，温育，形成固相包被抗原—抗体—酶标记复合物。 分离技术 将复合物转移到玻璃纤维上，用缓冲液洗涤，没结合的抗原