基因工程实验指导邢万金 扈廷茂 编写内蒙古大学生命科学学院生物系基因工程实验室.pdfVIP

基因工程实验指导 邢万金 扈廷茂 编写 2005 6 年 月 （第二次修订） 内蒙古大学生命科学学院生物系基因工程实验室 目录 基因工程实验注意事项——————————————————————————— （2） 实验流程参考图—————————————————————————————— （3） 第一部分 质粒DNA 的提取和酶切电泳鉴定 实验一 质粒DNA 的小量制备——————————————————————— （4） 实验二 质粒DNA 电泳鉴定———————————————————————— （6） 实验三 质粒DNA 的酶切————————————————————————— （8） 第二部分 目的基因的获得和重组载体的构建 实验四 PCR 扩增制备目的基因——————————————————————— （10） 实验五 目的基因片段与载体连接—————————————————————— （12） 实验六 从琼脂糖凝胶中回收DNA 片断——————————————————— （14） 第三部分 感受肽细胞的制备和转化及筛选鉴定 实验七 感受态菌的制备—————————————————————————— （16） 实验八 细菌转化————————————————————————————— （18） 实验九 转化克隆的筛选和鉴定——————————————————————— （20） 第四部分 目的基因在原核细胞中表达与SDS鉴定 实验十 外源基因的诱导表达———————————————————————— （22） 实验十一 SDS检测表达蛋白————————————————————— （24） 附 录 附录1：表达载体pET-His 的相关资料———————————————————— （27） 附录2：从NIH 查阅的nattokinase （纳豆激酶）序列之一———————————— （28） 附录3：本实验所用的克隆载体图—————————————————————— （29） 基因工程实验注意事项 1．上实验课的学生每两人分为一个小组。 2．课前要提前预习实验内容，弄懂实验设计的原理，理清实验顺序。认真填写 《本科基因 工程实验论文开题报告》，制定实验方案（没有方案或方案不合理者不能进入实验操作）。 3．实验指导中所写的实验一、实验二等并非严格的实验顺序，只是提供一种相关的实验操 作技术。各小组学生应根据整体的实验策略制定自己的实验顺序和计划。 4．由于实验内容多，时间短，多数实验需要同时或穿插进行，一定要做好统筹安排。 5．本实验课中的所有单项实验都属于一个整体流程。实验时间安排上没有上下午晚上等严 格的作息安排，一切服从实验进度，必须在 10 天之内完成。 6．实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步骤、结果等，以备查询！ 7．对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作 （尤其是微量移液器！）。在操作的过程中 发现任何意外的现象都要及时向任课教师汇报。 8．写作实验报告和实验论文一定要文理通顺、逻辑清晰、图表说明详细，讨论分析透彻（包 括操作的错误）。 9．在实验室内不能大声喧哗。 10．在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里 （或先放在自己的桌面一角），严禁 随地投弃！特别注意对废弃细菌的杀灭和有毒垃圾的定点投放。 11．实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数目，向教师汇报征得同意后方可离 开实验实。 12．值日组的同学最后离开，等待清扫实验室的卫生，关闭门窗水电。 13．实验时损坏的任何物品都要及时申报。 实验流程参考图 制备感受态菌DH5a,BL21 （DE3） 提质 PCR 与 pMD