铜锌超氧化物歧化酶Cu2Zn2SOD在汞电极上的吸附研究.PDFVIP

维普资讯 第 7期 无 机 化 学 学 报 Vo1．19，No．7 20o3年 7月 CHINESE JOURNAL OFINORGANIC CHEMISTRY Ju1．，2003 也 穹 研究简报 穹 穹 穹 铜锌超氧化物歧化酶 (Cu2Zn2SOD)在汞电极上的吸附研究 梅光泉 ，1,2 钱 雯 罗勤慧 王志林 (’南京大学配位化学国家重点实验室，南京 210093) (江西宜春学院理学院，宜春 336000) 关键词： Cu：Zn2SOD 汞电极 吸附 循环伏安 双阶跃计时电量 分类号： 0614．121 0614．24 1 0614．24 3 金属氧化还原蛋 白质的电化学行为作为生物电 行为作 了深入 的探讨。 化学领域 中一个重要的研究内容，受到了广泛的关 1 实验部分 注 ¨一1，生物体系一些重要的反应均与基本 电荷运 动有关，如生物催化、神经传导、光合作用以及呼吸 1．1 仪器与试剂 作用等均涉及到一些重要氧化还原蛋白质的氧化还 所用化学试剂均为分析纯并经二次蒸馏水重结 原过程。利用电化学的基本原理和实验方法，不但 晶，实验溶液均 由二次水配制 。 能在生命体系和有机组织的整体水平上，更主要是 美 国M270电化学分析仪和M273恒电位仪。伏 能在分子和细胞水平上研究氧化还原蛋 白质体系中 安分析 以M303悬汞电极为工作 电极 ，面积 A= 的电子转移以及氧化态转化的化学本质和规律。 0．017cm，饱和甘汞 电极为参 比电极，铂环丝作为辅 铜锌超氧化物歧化酶 (CuZnSOD)是一个二聚 助电极组成三 电极系统。研究SOD在汞 电极吸附时 体，由两个等同的亚单位组成，每一个亚单位含有咪 以滴汞电极为工作电极，滴汞时间4s，汞滴流量为 唑桥联的铜(Ⅱ)和锌(Ⅱ)离子，催化反应发生在铜(Ⅱ)中 1．45mg·s～。用双阶跃计时电量法测定吸附量，所 心，锌(Ⅱ)起着稳定 的作用H1。由于超氧化物酶具有复 用电极为 0．035cm2的悬汞电极 的三电极体系。电解 杂结构，它像其他蛋 白一样易吸附在电极上变性，且 池 内阻由仪器补偿。每次测定均重复3次，取其平均 电极过程缓慢，给研究带来困难，故至今对 SOD的 值，氧化还原电位测定误差为 -i-5mY。若无特殊标 电化学研究报道太少。近年来有的学者加人 中介剂 明，电位均相对于饱和甘汞电极。 改善电极过程 1，得到了成功。最近我们致力于不加 1．2 实验方法 中介剂在选择适当电极下进行研究。我们选用电介 1．2．1 SOD的制备 石墨电极对 Co2Co2SOD和 Cu2Co2SOD的研究 1。用 从动物红细胞中，按文献 [81得到SOD粗提液。 悬汞电极 (HME)、滴汞电极 (DME)对猪超氧化物歧 粗提液分别经 DEAE．32柱分离纯化 、SephadexG50 化酶 (PESOD)及其重组衍生物 E：ESOD，Cu：ESOD， 柱脱盐、超滤浓缩、冷冻干燥等步骤，得到冻干精品， EZnSOD(EESOD为去金属后 的脱辅基酶)的研 于 一20℃保存备用。SOD精品经聚丙烯酰胺凝胶 电 究[71也获得了 良好的效果。本文进一步讨论牛血超 泳，均得到一条具活力清晰区带，又经 SDS．聚丙烯 氧化物歧化酶 (BES