cd47在非小细胞肺癌转移中的作用及相关机制研究内科学专业论文.docxVIP

目 目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 ． ．．1 (二)英文摘要 6 二、正文 ．12 (一)前言(一)日lJ舌 ．．12l么 (--)参考文献 ．．16 第一部分非小细胞肺癌组织CD47的表达及其临床意义 ．．20 (三)引言 20 (四)材料和方法 20 1．研究对象 20 2．材料 ．21 2．1仪器 21 2．2试剂 ． ．．21 2．3试剂配制 22 3．方法 23 3．1 Western blot ．．23 3．2 免疫组织化学染色h ．25 3．3统计学分析 26 (五)结果 26 1．CD47在NSCLC组织表达的Western blot检测 26 万方数据 2．CD47在NSCLC患者表达的免疫组化染色 2．CD47在NSCLC患者表达的免疫组化染色 一 27 3．CD47表达与NSCLC患者临床病理特征的关系 ．．27 (六)讨论 ．．29 (七)小结 31 (八)参考文献 ．．32 第二部分CD47在NSCLC侵袭转移中的作用 ．．34 (三)引言 ．．34 (四)材料和方法 ．．35 1．材料 ．35 1．1仪器 ．．35 1．2细胞株 ．36 1．3试剂 ．．36 1．4试剂配制 ．．39 2．方法 ．39 2．1 细胞培养 39 2．2 Western blot ．．41 2．3 Real．time PCR ．42 2．4 细胞免疫荧光化学 ．44 2．5 微流控芯片制作 ．． 44 2．6 微流控芯片上细胞转移能力观察 ．．4 5 2．7 siRNA下调CD47的表达 ．．45 2．8 pcDNA3．1-3 xFlag-CD47表达载体构建及转染 ．．46 万方数据 2．9 2．9 噻唑兰(MTT)法检测细胞活性 ．．48 2．10裸鼠皮下人肺癌移植瘤白发转移模型的建立 49 2．1 1 裸鼠尾静脉肺癌转移模型的建立 ．． ．．49 2．12 HE染色 49 2．1 3统计学分析 ． 50 (五)结果 ．．50 1．NSCLC细胞株CD47表达水平检测 ．．50 1．1 w e st ern bl ot检测CD 4 7在N S C LC细胞株的 蛋白表达情况 50 1．2 Real．time PCR检测CD47在NSCLC细胞株的 mRNA表达情况 50 1．3细胞免疫荧光NSCLC细胞株CD47表达水平检测 ．．51 2．验证细胞转移能力的微流控芯片模型构建 ．5 1 2．1 微流控芯片转移模型的构建 ．．5 1 2．2微流控芯片转移模型的细胞转移能力观察验证 ．52 3．基于微流控芯片转移模型过表达或下调CD47蛋白表达后肺癌 细胞侵袭转移能力变化的观察 53 3．1 siRNA可以有效下调CD47蛋白表达 53 3．2 下调CD47蛋白表达后细胞转移能力验证 ．53 3．3 siRNA对细胞增殖能力的影响 ．．54 3．4 pcDNA3．1．3xFlag—CD47过表达CD47的验证 55 3．5 CD47过表达后细胞转移能力验证 ．5 6 万方数据 4．下调CD47表达抑制肺癌细胞的体内成瘤 4．下调CD47表达抑制肺癌细胞的体内成瘤 ．57 5．下调CD47表达抑制肺癌体内转移侵袭能力 ．．58 (四)讨论 ．60 (六)小结 ．．63 (七)参考文献 ．64 第三部分CD47促进非小细胞肺癌转移机制的初步探讨 ．．66 (三)引言 66 (四)材料和方法 ．66 1．材料 66 1．1仪器 ．66 1．2 细胞株 ．67 1．3 NSCLC组织标本 ．67 1．4试剂 ．68 1．5 试剂配制 70 2．方法 ．71 2．1 细胞培养 ．71 2．2 Western blot ．．72 2．3 微流控芯片制作 ．．74 2．4 微流控芯片上细胞转移能力观察 74 2．5 RNA干扰下调CD47或Cdc42表达 74 2．6 CD4 7过表达质粒转染肺癌细胞株 ．．7 5 2．7免疫组织化学染色 ．75 万方数据 2．8统计学分析 2．8统计学分析 ．76 (五)结果 76 1．CD47和Cdc42在NSCLC细胞株中的表达 ．76 2．非小细胞肺癌患者组织标本CD47和Cdc42表达 ．．77 3．CD47介导Cdc42表达调控细胞转移能力 ．78 (六)讨论 ．79 (七)小结 82 (八)参考文献 ．83 三、综述 85 (一)综述 ．．85 (二)参考文献 ．．92 五、攻读学位期间发表文章情况 98 六、致谢 99 万方数据 大连医科大学博士学位论文CD47在非小细胞肺癌转移中的作用及相关机制研究 大连医科大学博士学位论文 CD47在非小细胞肺癌转移中的作用及相关机制研究 博士研究生：赵辉 指导教师：王琪教授 专业名称：内科学 摘要