桑树韧皮部汁液mulmir482和mulmir58的生物学功能研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所 取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个 人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同 意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子 版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术 信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》并向社 会公众提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：蚋 导师签名 薹篓聋 日 万方数据 符号说明 符号说明 f㈣罂炒 ABA：Abseisic acid，脱落酸 Amp：Ampicillin，氨苄青霉素 BLAST：Basic local alignmem search tool，基本局部比对查寻工具 CaMV35S：promoter of Cauliflower Mosaic Virus，花椰菜花叶病毒启动子 CTAB：cetyl trimethyl ammoniu bromide，十六烷基三甲基溴化铵 ddH20：Distilledant deionized water,重蒸水 DEPC：Diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙脂 dNTP：Deocyribonucleoside triphosphate，脱氧核糖核苷三磷酸 EB：Ethidium bromide。溴化乙锭 EDTA：ethylene diaminetetracefic acid，乙二胺四乙酸 Kan：Kanamycin，卡那霉素 LB：Luria-bertani medium，LB培养基 miRNA：microRNA，微小RNA NCBI：National Center for Biotechnology Information。美国国立生物技术信息中心 PCR：Polymerase chain reaction，聚合酶链式反应 pre-miRNA：miRNA precursor,miRNA的前体 pri-miRNA：Primary miRNA，miRNA初级转录本 PTGS：post-transcriptional gene silencing，转录后基因沉默 PVP：polyvinyl lpyrrolidone，聚乙烯吡咯烷酮 qRT-PCR：Real time quantitative reverse transcerption PCR,实时定量反转录PCR RISC：RNA induced silencing complex，RNA诱导的沉默复合体 RNAi：RNA interference，RNA干扰 SDS：sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠 siRNA：small interfering RNA，小干扰RNA TGS：transcriptional gene silencing，转录水平的基因沉默 万方数据 目 目 录 中文摘要 ．1 Abstract ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．：； 1前言 6 1．1植物miRNAs的研究进展 6 1．2植物韧皮部汁液miRNA的研究进展 ．．9 1 13 MiR482的研究进展 ．．11 l，4本研究的目的和意义 14 2材料与方法 15 2．1材料 15 2．1．1植物材料 一15 2．1．2菌株与载体 ．．15 2．1-3试剂 15 2．1．4主要仪器 ．．15 2．1．5引物 15 2．2方法 17 2．2．1 MiRNAs基因的克隆 ．17 2。2。1。1桑树叶片RNA的提取 17 2．2．1．2 eDNA的合成 ．．17 2．2．1．3 PCR扩增 ．．18 2．2．1．4目的片段的回收 ．．19 2．2．1．5大肠杆菌感受态的制各 ．．19 2．2．1。6目的片段与克隆载体的连接、转化 ．．19 2．2．1．7序列测定 ．．20 2．2．2 MiRNAs植物表达载体的构建 ．．20 2．2．2．1质粒的提取 一20 2．2．2．2质粒的酶切和目的片段回收 ．．2l 2．2．2．3 MiRNA植物表达载体构建 21 2．2．3转miRNAs基因拟南芥的获得 ．21 万方数据 2．2．3．1农杆菌GV3 2．2．3．1农杆菌GV3 101感受态细胞的转化 ．．21 2．2．3．2拟南芥的无土栽培 ．．22 2．2．3．3拟南芥的侵染与筛选鉴定 ．．22 2．2．4转