毒死蜱的微生物降解研究进展.doc

. .. 毒死蜱当前仍是全球应用最广泛的五种杀虫剂之一，也是我国用量最大的农药品种，是对硫磷、甲胺磷等高毒有机磷农药的替代品种，主要作为农用杀虫剂防治水稻、蔬菜等作物的螟虫、韭蛆等近百种害虫，也作为卫生杀虫剂用于防治白蚁和蟑螂等[5]。美国在20世纪末期毒死蜱年用量就已达到约7000吨，其中3/4以上被应用于植物保护，其余则用于家庭卫生。毒死蜱系列产品（乐斯本乳油）于1984年在我国农业部农药检定所取得登记，获准在水稻、棉花、蔬菜等作物上使用；同年，上海市政府在菜篮子工程建设中，推荐了乐斯本等几种农药用于防治蔬菜害虫，以彻底取代甲胺磷等高毒农药。 虽然毒死蜱属于中等毒性杀虫剂，但危险性仍然很大，它能够通过皮肤进入人体，并且在人体内有累积现象，长期或重复给予亚毒性剂量即可对细胞、神经轴突等产生影响，甚至可引起行为改变,WHO规定的毒死蜱可接受摄取量为10μg/kg/d[6,7]。随着健康及环保标准的提升，在许多发达国家毒死蜱已被禁止使用，2000年6月8日美国环保署（EPA）宣布，禁止在美国家庭和庭院内使用毒死蜱杀虫剂，指出这种常用的杀虫剂会危害到儿童的健康安全。依据美国环保署的意见，新西兰政府决定含有毒死蜱的产品自2005年12月31日将不再应用于白蚁的防控，并号召取消毒死蜱在所有有可能导致孩子暴露的地方使用，2011年10月28日，新西兰环保署提议禁止毒死蜱用于花园。为了保证儿童健康，几乎所有的发达国家都已经禁止毒死蜱应用于家居，但是并没有完全禁止其在农业领域使用；在大多数发展中国家，毒死蜱仍是应用最广泛的农用杀虫剂、由于经济、技术发展的限制，短期内也不可能完全禁止毒死蜱的应用，那么如何减少应用毒死蜱所导致的负面影响就成为一个亟待解决的课题。 1.2 毒死蜱的微生物降解研究进展 微生物的降解作用被认为是环境中有机磷农药残留降解的最主要因素，因此分离筛选能够高效降解有机磷农药的微生物是解决农药污染，进行环境修复的一项有效措施[8,9]。某些有机磷降解菌的降解作用具有广谱性，能降解多种不同的有机磷农药，这是由于有机磷农药具有相似的化学结构，降解菌产生的相关酶类作用于有机磷农药的共有结构所致，而降解速度的快慢则可能与农药自身的化学稳定性、降解酶接触农药靶标位点的难易程度、农药及降解产物对酶促反应的反馈作用等多种因素有关[10,11]，有机磷农药初步水解路径如图1-2。筛选能降解多种有机磷农药的微生物菌株对于农药的污染治理也是一项意义重大的工作,现在也已经分离到了一些这样的菌株[12]。例如，黄杆菌属细菌Flavobacterium sp. ATCC 27551的水解酶能有效的水解几乎所有已知的O-P键[13]；缺陷假单胞菌Pseudomonas diminuta也具有相同降解功能[14]；近年来也有一些具有类似降解功能的菌株报道[15,16]。 一般来说，微生物长期持续接触某种农药就可能会诱导出降解该农药的能力，所以经常从被农药污染的土壤或施用过该农药的土壤中分离针对该农药的降解菌；也可通过人工措施使微生物适应目标农药，以获取高耐受能力和降解能力的微生物菌株。较早关于毒死蜱降解菌的报道是Sethunathan N.等[13]于1973年 从施用二嗪农的土壤中筛选出的黄杆菌（Flavobacterium sp.）以及Serdar C.M.等[14]在1982年筛选出的缺陷假单胞菌（Pseudomonas diminuta），它们能以共代谢的方式降解毒死蜱，但是不能以毒死蜱作为唯一碳源和能源生长。Mallick等[17]在1999年报道一株从土壤中筛选出的节杆菌（Arthrobacter sp.）能在无机盐培养基中降解毒死蜱，能在48 h内将10mg/L毒死蜱完全降解。Ghanem等[18]和Li等[19]分别分离到了Klebsiella sp.和Sphingomonas sp.，这两个菌株能以毒死蜱作为唯一碳源和磷源。除细菌外，也分离到一些能降解毒死蜱的真菌，Bending G.D.等[20]（2002年）筛选出2株能降解毒死蜱的真菌Hypholoma fascicularae和Coriolus versicolor。方华2007年从土壤中筛选到一株毒死蜱降解菌，经鉴定为轮枝孢属（Verticillium sp.）真菌。 大量的研究表明，在土壤或水体中微生物降解毒死蜱的主要中间产物是3,5,6-三氯-2-吡啶酚(3,5,6-trichloro-2-pyridinol,TCP)，如图1-3 [21,22]。Racke等人将毒死蜱用14C标记后进行微生物降解实验，其结果表明毒死蜱经土壤微生物作用后的初步降解产物为3,5,6-三氯-2-吡啶酚(TCP)，TCP能被进一步降解，终产物为CO2[23,24]。但TCP的进一步降解要缓慢得多，