液相色谱仪.ppt

一、色谱法概述 色谱法是一种分离技术 色谱法原理 是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解、分配、吸附等化学作用性能的差异，当两相作相对运动时，使各组份在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。 两相中有一相是固定的，叫作固定相，有一相是流动的，成为流动相。 高效液相色谱与气相色谱比较 液相色谱仪 高效液相色谱分析过程 　 分析前，选择适当的色谱柱和流动相。开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大输入计算机，经过工作站数据处理，就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。 二、主要部件 (2) 进样装置 (3) 高效分离柱 (4)检测器 ⑷缺点 　①只能检测有紫外吸收的样品； 　②检测波长＞流动相的截止波长。 ⑸波长选择 　①选择λmax作检测波长，以得到较高的灵敏度； 　②检测波长＞流动相的截止波长。 ⑹紫外检测器的类型 　①固定波长型(已淘汰)； 　②可变波长型(最常用)； 　③二极管阵列检测器(最新型)。 b. 光电二极管阵列检测器 二极管阵列检测器(diode-array detector,DAD)以光电二极管阵列作为检测元件的紫外检测器它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。 DAD与UV检测器的区别 普通UV检测器是先用单色器分光，然后让特定波长的光进入流通池。DAD检测器是先让所有波长的光都通过流通池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检测。 c. 示差折光检测器（Differential refractive index detector） d. 荧光检测器（Fluorescence detector） 5）电导检测器 电导检测器主要用于离子色谱的检测。 其原理是基于待测物在一些介质中电离后所产生的电导（电阻的倒数）变化来测量电离物质的含量。 电导检测器的主要部件是电导池。其响应受温度影响较大，因此需要将电导池置于恒温箱中。另外，当pH7时，该检测器不够灵敏。 溶剂的脱气处理 脱气目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰 面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 脱气方法 1.超声波脱气法 2.抽滤脱气法 3.He脱气法 流动相(溶剂系统) 正相洗脱与反相洗脱 流动相(溶剂系统) 洗脱方式 流动相(溶剂系统) 洗脱方式 梯度洗脱的实质：是通过不断地变化流动相的浓度配比，来调整混合样品中各组分的K值，使所有谱带都以最佳平均K值通过色谱柱。 比较梯度洗脱与程序升温：在梯度洗脱中溶质K值的变化是通过溶剂的极性、pH值和离子强度来实现的，用于分离组分性质差别较大的复杂样品；而程序升温是借改变温度来影响溶质的K值，用于分离宽沸程的混合样品。 优点：①缩短分析周期；②提高分离效果；③改善峰形，很少拖尾；④增加检测灵敏度。 等度洗脱与梯度洗脱 2. 按孔隙深度分 表面多孔型：以实心玻璃珠为基体，在基体表面覆盖一层多孔活性材料(如 硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等)。表面多孔型固定相的颗粒大(易装柱)、多孔层厚度小且孔浅(渗透性好，出峰快)；但交换容量小。适于常规分离分析。 全多孔型：全部由硅胶或氧化铝微粒聚集而成，因颗粒极细，因而孔径小、传质快、 柱效高。特别适于复杂混合物的分离。 （2）用体积表示的保留值 分配系数 K 的讨论 4. 区域宽度 衡量色谱峰宽度的参数，三种表示方法： （1）标准偏差(?)：即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。 （2）半峰宽(Y1/2)：色谱峰高一半处的宽度 Y1/2 =2.354 ? 。 （3）峰底宽(Wb)：Wb=4 ? 。 2. 相平衡参数（1）分配系数（ partition coefficient） K 组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度（单位：g / mL）比，称为分配系数，用K 表示，即： 分配系数是色谱分离的依据。 一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢； 试样一定时，K主要取决于固定相性质； 每个组份在各种固定相上的分配系数K不同； 选择适宜的固定相可改善分离效果； 试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础； 某组分的K = 0