基于hgfap启动子的shp2基因敲除对幼鼠大脑皮质小脑及脑干结构功能的影响外科学神经外科专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 致 谢 光阴荏苒，日月如梭。三年博士生学习即将结束之时，也是我十年浙大校园 生活落下帷幕之际。回想这十年中的点点滴滴，虽然有时跌跌撞撞，偶尔摔个跟 头，但之所以能够一步一个脚印坚定地走来，离不开所有陪伴我的老师、同学和 亲友的搀扶和倾力相助。十年间，每一幕喜怒哀乐、每一波雄心壮志和每一次失 落迷惘都勾勒出我最珍贵、也最珍惜的青春年华；而它们带来的让我受益终生的 经历和收获，在这瞬间沉淀、升华。此时此刻，要感谢的太多太多。 首先，我要以最诚挚的敬意感谢我的恩师詹仁雅教授。是恩师对我的无条件 的支持、信任和严格的要求，让我顺利完成了课题，论文的一字一句都凝结了思 师的心血。我依然十分清楚地记得六年多前，自己带着无比兴奋、无限憧憬和一 丝惶恐不安，第一次走进恩师的办公室，递出人生第一份个人简历，以及当得知 成为恩师弟子后的荣幸和欣喜。从那以后，恩师一路悉心陪伴指导，无私地帮助 了我从本科实习、攻读硕士到攻读博士的整个研究生生涯。恩师渊博的学识、严 谨的治学、海纳百j1I的胸怀和独特的人格魅力无时无刻影响和感染着我，而恩师 超凡的敬业精神更让我深刻感受到作为“医者”的责任和骄傲，这一切我都将永志难 忘。“一名神经外科医生最重要的品质是什么?”是恩师时常问我的一个问题，每每 都让我陷入深思，每次思考却都有新的感悟。如今即将跨出校门，实践课堂之所 学，我想，“不忘仁心，修炼仁术，吃得起苦，耐得住寂寞”也许是初出茅庐的我能 向恩师给出的最好答案吧l 衷心感谢童鹰老师、潘剑威老师、万曙老师、温良老师对我学习、生活上无 私的关怀和帮助，以及临床工作上的细致指导。 衷心感谢谢强敏教授、沈建师兄、谢诒诚博士、董新威老师和蒋俊霞师姐在 实验技术、实验思路以及论文撰写等方面给予我的悉心指导和帮助。特别感谢孙 天孚、许康立、Thiti SamuthratI)币弟对实验开展方面给予的大力帮助。 感谢浙大一院神经外科团队的各位老师，也衷心感谢冀涛、范左栩、刘文超、 姜浩、翁宇翔、施成彰、黄凯源、杨骥骐、郑楚天、江昊、李永达等亲爱的师姐 师兄弟，没有他们的无私付出和帮助，就没有我今天的成绩。 最后深深地感谢我的父母，感谢他们给予我生命中最美好的一切。 朱 昱 2016年3月7日于紫金港 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 摘要 基于hGFAP启动子的Shp2基因敲除对幼鼠大脑皮质、小脑及脑 干结构功能的影响 浙江大学医学院 外科学(神经外科) 博士研究生 朱昱 导 师 詹仁雅教授 摘 要 研究背景： shp2对多种神经系统组织器官和细胞类型的发育及功能具有重要调控作用。 放射状胶质细胞在中枢神经系统中的重要功能近年来被逐渐发现，目前对于shp2 在放射状胶质细胞中的功能尚不清楚。受人神经胶质纤维酸性蛋白(hGFAP)启 动子调控的Cre重组酶表达于放射状胶质细胞中，是放射状胶质细胞条件性基因 敲除的有力工具。因此，培育并研究基于hGFAP启动子的s11p2条件性敲除小鼠 对于揭示调控中枢神经系统发育和功能的分子机制具有重要意义。 研究目的： (1)培育并鉴定基于hGFAP启动子的shp2条件性基因敲除小鼠 (2)观察并研究shp2条件性敲除对幼鼠生存、生长及躯体感觉运动功能发育的 影响 (3)研究shp2条件性敲除对幼鼠大脑皮质、小脑及脑干组织结构的影响并初步 探讨相关分子机制 研究方法： 本研究通过hGFAP．Cre转基因小鼠和Shp2n0圳“基因打靶小鼠交配产生 hGFAP．cre／Shp20。枷。“小鼠，即shp2条件性敲除小鼠。通过基因鉴定、ReN．time PCR、Westemblot及免疫组化等方式对shp2条件性敲除小鼠进行多方面的鉴定。 观察记录shp2条件性敲除小鼠的外观、生存时长、出生后体重及大脑重量增长情 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 摘要 况，并通过自主回巢实验、循声运动实验、躯体自主翻正实验及抓杆实验评估Shp2 条件性敲除幼鼠的感觉运动功能的发育情况。采用石蜡切片H．E、甲苯胺蓝染色对 Shp2条件性敲除小鼠的大脑皮质、小脑及脑干进行组织形态学学观察，并通过免 疫组化、免疫荧光对Shp2条件性敲除小鼠大脑皮质细胞增殖、凋亡的情况以及大 脑皮质、小脑、脑干神经元细胞、星形胶质细胞的数量的分布情况进行观察。最 后本研究通过Western blot实验对Shp2条件性敲除小鼠大脑皮质中Akt，Erk信号 通路蛋白的表达情况进行了检测