黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术.PDFVIP

微生物学通报 Oct. 20, 2015, 42(10): 2033−2040 Microbiology China © 2015 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.141030 生物实验室 黄曲霉毒素 B1 单克隆抗体的制备及间接竞争 ELISA 检测技术研究 谢珲 章先 王歆 凡鹏程 时玉菲 方维焕* (浙江大学动物科学学院 浙江省动物预防医学重点实验室 浙江 杭州 310058) 摘 要：【目的】制备黄曲霉毒素B1 单克隆(AFB )抗体，建立间接竞争ELISA 检测方法用于污 1 染样品中AFB 的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1 的完全抗原AFB -BSA 后免疫 1 1 Balb/c 小鼠，经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1 单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱 生腹水法制备抗体，通过间接 ELISA 方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件，建立稳 定的间接竞争ELISA 检测方法，并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1 。【结果】获得4 株稳 定分泌抗AFB1 单克隆抗体的杂交瘤细胞株，选择3B9 细胞株制备抗体，测定抗体亚类为IgG1 ， 效价为 1:204 800，与黄曲霉毒素B2 、G1 、G2 和M1 的交叉反应率分别为2.2% 、33.9%、1.8% 和4.1% ，与赭曲霉毒素A 、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1 2 间接竞争ELISA 检测方法，在AFB1 浓度为1.04−25.00 µg/L 范围内呈线性(R =0.993 1) ，检测限 为1.04 µg/L，半数抑制率(IC50)为6.03 µg/L ，平均加标回收率在线性范围内可达85%−120%，变 异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实，该方法与进口ELISA 试剂盒检测一致性良 好，可用于实际样品中黄曲霉毒素B1 的快速筛检。 关键词：黄曲霉毒素B1 ，单克隆抗体，间接竞争ELISA Preparation of anti-aflatoxin B1 monoclonal antibodies and its use in an indirect competitive ELISA for aflatoxin B1 * XIE Hui ZHANG Xian WANG Xin FAN Peng-Cheng SHI Yu-Fei FANG Wei-Huan (Zhejiang Province Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058, China) Abstract: [Objective] Prepa