间充质干细胞mscs神经向诱导实验条件优化及胞内钙离子浓度动态变化细胞生物学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 辽宁师范大学硕士学位论文} 辽宁师范大学硕士学位论文 }商 要 目的：分离提取骨髓间充质干细胞(Bone marl‘OW—derived mesenchymal stem cells，BMSCs) 及脂肪间充质干细胞(Adipose—derived mesenchymal stem cells，AMSCs)比较二者生物学 特性及体外增殖能力，并探讨i种不同成神经诱导方法对AMSCs向神经样细胞分化过 程中的影响，提高AMSCs向神经样细胞分比诱导效率，从而为研究AMSCs向神经样 细胞分化机制奠定基础。深入探讨成球诱导方0去中细胞内钙离子浓度变化，有助于阐明 AMSCs的成神经诱导分化机理，为AMSCs在临床再生医学上的应用提供理论依据。 方法：(1)采用密度梯度离心法分离BMSCs及酶消化法体外分离AMSCs。检测MSCs 的表面抗原以及将MSCs进行体外成骨诱导，成脂诱导对MSCs的干细胞特性进行鉴定。 (2)三种诱导方案诱导AMSCs向神经样细咆分化，包括化学诱导方法、鼠脑条件培养 基诱导方法、成神经球分化诱导方法。观察诱导中的形态变化，免疫荧光检测神经细胞 特异性标志物p—III—Tubulin，NSE和Nissl的表达。确定最高效的诱导方法。(3)采取成 神经球诱导方法对AMSCs进行诱导，利用tlu03／AM对AMSCs及诱导过程中的类神经 细胞进行染色，通过流式细胞仪对AMSCs群体细胞的钙离子浓度检测，并通过共聚焦 显微镜确定单个细胞中钙离子浓度的变化，研究细胞内游离钙离子浓度在AMSCs向神 经样细胞分化过程中的变化。 结果：(1)获得的BMSCs及AMSCs可稳定传至20代以上。表型鉴定结果为CDl3、 CD90阳性，CD34、CD45阴性，AMSCs的CDl06阴性，BMSCs CDl06表达弱阳性。 成骨细胞分化28d时，Von kossa阳性，向脂肪细胞分化14 d时，油红O染色阳性。(2) 用化学因子诱导AMSCs向神经样细胞分化，30 d时出现成熟神经元标记NSE的表达， 阳性值为29．5％，但细胞凋亡明显。鼠脑条件培养基诱导14 d时，NSE略有表达，值为 12．8％。采用成神经球诱导方法进行7 d成神经球诱导，再经过7-9天的分化培养。在7 d时有8．9％NSE表达。B—III．Tubulin及Nissl在经三种诱导方法诱导成熟后，均为阳性 表达。(3)成球法诱导AMSCs向神经样细胞分化过程中，取AMSCs及诱导不同时问点 的成神经细胞从细胞整体及个体角度分别证实：在成球诱导法诱导下，通过7天成神经 球后，在继续的分化过程1．6天时细胞内钙离子浓度先呈上升趋势，在分化7-9天时达 到高峰，随后急剧下落，与细胞培养时细胞发生凋亡的时间一致。 结论：AMSCs较BMSCs具有较高的增殖能力，神经球分化方法更能够高效低损伤的诱 导AMSCs分化为类神经细胞，细胞内游离钙离子在AMSCs向神经样细胞分化过程中 会发生变化，对维持细胞分化，存活均起到了一定的作用。 关键词：骨髓间充质干细胞；脂肪间充质干细胞；成神经诱导；钙离子浓度变化 、司充质干细胞(MSCs){ 、司充质干细胞(MSCs){：00经向诱导实验条件优化及胞内钙离子浓度动态变化 Experimental conditions optimization during MSCs differentiate into neural like cells and the detection of Calcium ion dynamic change Abst ract Objective：In order to compared the biological characteristics and proliferative capacity between bone marrow derived mesenchymal stem cells(BMSCs)and Adipose—derived mesenchymal stem cells(AMSCs)in vitro，and discussed three different methods of induction about the differentiation process of AMSCs to neuron—like cell，improve the efficiency of AMSCs differentiate into neuron—like cells，Further discussed Neuron—like cell differentiation mechanisms．Depth explore the change