血型鉴定与交叉配血.ppt

原理 根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反定型鉴定ABO血型。 正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。 血型抗原 红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原 其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原 血型抗体 常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类 分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白）使致敏红细胞发生凝集。 IgG structure 分子最大的一种Ig，多以五聚体形式存在。在盐水介质中能直接连接相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应，因此又称为完全抗体。 IgM structure 血型血清学检测的基本原理 Reaction of antibodies （一）盐水介质法 ABO血型鉴定实验原理 抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型。 试剂 抗A、抗B试剂血清 5%的A型、B型红细胞悬液 受检者血清 5%的受检者红细胞悬液 取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。 实验步骤 （4）观察结果 如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （5） 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 2.试管法(正定型) A B A标准血清 2滴 B标准血清 2滴 受试者的红细胞悬液 1滴 1滴 混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 取出观察结果: 完全凝集:管底部有红细胞的凝块，管底细胞边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散； 完全不凝:血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐，用手轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成为均匀的悬液； 轻微凝集:必须将液体转到载玻片上镜检后判定凝集程度。 试管法(反定型) Ac Bc 受检者血清 2滴 2滴 2滴 5%的A型红细胞悬液 1滴 5%的B型红细胞悬液 1滴 立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。 轻轻扣动试管底部，观察结果----同前 血型判定 Rh血型鉴定 一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液 二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性 1、原理 血型抗体与对应红细胞抗原在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞(主侧)以及受血者红细胞与供血者血清(次侧)之间有无凝集现象，判断受血者与供血者之间有无ABO血型不合的情况。 红细胞血型系统交叉配血试验 交叉配血试验的内容 主侧配血 用患者血清与供 者红细胞进行试验 次测配血 供血者血清与患 者红细胞进行试验 交叉配血的要求 主侧配血要求： 绝对不可以有凝集或溶血现象。 次测配血要求： 供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但不可以有溶血。 交叉配血试验方法 盐水介质配血 酶介质配血 菠萝酶，无花果酶，木瓜酶 抗球蛋白介质配血 经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法 聚凝胺介质配血 凝胶方法配血 盐水介质配血方法 凝聚胺(Polybrene)配血法 原理：凝聚胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细