佛手柑内酯对骨髓间充质干细胞成骨分化能力影响的初步研究影像医学与核医学专业论文.docxVIP

一炒㈣佛手柑内酯对骨髓间充质干细胞成骨分化 一炒㈣ 佛手柑内酯对骨髓间充质干细胞成骨分化 能力影响的初步研究 硕士研究生：肖继杰 指导老师：李绍林 摘要 一、研究背景 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCS)自 20世纪中期被发现以来，一直备受科学界的关注。BMMSCS来源于中胚层， 是一类具有自我复制和多向分化潜能的非造血干细胞，主要存在于全身结缔组 织和器官间质中，在骨髓中的含量最为丰富。近年来，随着大家对骨髓间充质 干细胞研究和认识的加深以及细胞生物工程技术的不断发展，骨髓间充质干细 胞在临床医学和再生医学中应用越来越广泛，是当前组织修复领域的研究热点。 BMMSCS在体外分离培养方法简单，扩增速度比较快，并且在一定条件下可以 诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等，BMMSCS的临床应用大部分都 是基于它的多向分化潜能，但是BMMSCS的体外诱导分化条件不成熟，诱导 效率不稳定，有待进一步的研究。 骨质疏松(osteoporosis，OP)是以低骨量和骨组织微结构破坏为特征，导 致骨质脆性增加并且容易引起骨折的一种全身性代谢性疾病。尤其在绝经后妇 女常见，绝经后雌激素分泌明显降低，骨质吸收和骨质形成均加快，呈高转换 型骨代谢，骨质吸收的过程相比较成骨的过程短，从而造成骨量的丢失。成骨 细胞、破骨细胞及骨髓间充质干细胞在骨质疏松的发生机制中占有很重要的地 位。近年来所研究的具有抗骨质疏松作用中药活性成分多是促进成骨细胞的增 殖或者抑制破骨细胞的生成而发挥功效，而所属药物成分对骨髓间充质细胞的 万方数据 摘要作用常常被忽略。目前，关于中药成分作用于骨髓间充质干细胞从而促进成骨 摘要 作用常常被忽略。目前，关于中药成分作用于骨髓间充质干细胞从而促进成骨 能力防治骨质疏松鲜有报道，相关机制的研究更不明确。 佛手柑内酯(Bergapten，BP)为呋喃香豆素天然产物，是多种植物的次级 代谢物，广泛的存在于自然界中，更是佛手、当归、香橼和羌活等众多中药材 中的有效成分之一。BP在国外运用于白癜风等皮肤病的临床治疗已经有几十年 的历史，并且取得不错的疗效。近年来BP在肿瘤方面作用的研究成为热点， 有研究发现，其对胃癌、肝癌、乳腺癌及鼻咽癌细胞具有体外抑制作用，并且 对相关的机制进行了研究，取得了不错的进展。 同时，BP的其他功效也进行 了广泛的研究，有研究发现，BP可以通过抑制破骨细胞及其前体细胞的形成从 而阻止脂多糖导致的骨质流失和吸收。BP也可以通过增高骨形成蛋白2(BMP．2) 的表达加强骨生成。由此可见，BP确实具有促进骨质形成及抑制骨质吸收的功 能。但是BP在骨髓间充质干细胞成骨方面的作用及防治骨质疏松的动物实验 未见报道。 Wnt信号通路包括3条细胞内信号转导通路，即wnt／B．catenin信号转导通路、 Wnt／Ca2+信号转导通路和Wnt／平面细胞极性(PCP)信号转导通路。Wnt／f1．catenin 信号通路参与调控胚胎的正常发育和细胞增殖、迁移与分化等重要生理过程， 在骨量和骨生长调控的重要作用得到证实，是目前骨骼系统相关疾病发病机制 及骨代谢研究的热点。BMMSCS的分化方向受多种因素，多个信号途径的调节， Wnt／13．catenin信号通路同归旁分泌或者自分泌的方式影响细胞的分化和增殖。正 常状态下，大部分胞质内的13．catenin被束缚在由细胞膜向胞内伸出的E．钙粘着蛋 白上，而其余部分与大肠腺瘤样蛋白和轴素多聚蛋白复合物结合，有利于胞浆 内糖原合成酶激酶(GSK．313)磷酸化和上述复合物结合的B．catenin，被磷酸化 的p．catenin易被泛素．蛋白酶体系统降解，从而保持细胞质内游离的13．catenin浓度 处于相对较低的状态，在Wnt信号通路活化时，通过拮抗对p．catenin的磷酸化、 降解作用，使胞质内13-catenin含量积聚并且移至核内，与核内转录因子TCF／LEF 家族相连接，从而控制下游靶基因的调控长骨远端生转录和表达。因此，在一 II 万方数据 硕士学位论文定程度上讲，BP通过调控Wnt信号通路从而参与到调控BMMSCS向成骨细胞分 硕士学位论文 定程度上讲，BP通过调控Wnt信号通路从而参与到调控BMMSCS向成骨细胞分 化的过程中来的。j3-catenin作为Wnt信号通路的下游蛋白，是Wnt行使生理功能 的重要信号分子，在实际的研究过程中，人们往往通过检测p-catenin的表达量来 衡量wnt信号通路的活性，因此，不难看出p-catenin是wnt通路中非常重要的蛋 白因子。 二、目的 1．探索不同浓度BP对BMMSCS增殖活性的影响，筛选适合BMMSCS分化增殖 的药物浓度。 2．研究体外条件