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红细胞血型血清学技术 标本 盐水介质凝集试验 酶处理细胞的凝集试验 抗球蛋白试验 聚凝胺的应用 标 本 （一）标本采集1．红细胞标本 采集方法： 针刺耳垂或指尖，直接用生理盐水配成红 细胞悬液待用。 静脉采血，用抗凝剂（ACD、CPD、Na-EDTA等）抗凝。 直接从血凝块（血柱）中洗脱游离的红细胞。 （一）标本采集1．红细胞标本 ★特殊情况： 用于抗球蛋试验（Coomb’s试验）的标本要抗凝，否则，补体C3b、C4b容易致敏红细胞造成抗球蛋试验（Coomb’s试验）假阳性。 存在有受Ca2+抑制的自身抗体时，不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本。 （一）标本采集2．血清标标本 采集方法： 取静脉血注入干燥试管内，放置37℃水浴中，凝固后用玻璃棒搅动血块，使之与试管壁剥离， 然后放置4℃冰箱过夜，离心分离血清。 必要时，当血液凝固后即可离心分离血清。 （一）标本采集2．血清标标本 ★需注意的问题： 血清如需于4℃冰箱保存，需加叠氮钠（NaN3）防腐，叠氮钠（NaN3）终浓度0.1%。 血清如用于制备试剂（如抗A、抗B标 准血清）要经过56℃灭活补体后才能使用。 一般实验避免使用血浆，防止纤维蛋白的干扰。 （二）红细胞悬液的配制用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要用大量生理盐水洗一次，其目的是通过洗涤可以去除红细胞表面的下列物质： 1) 少量的血浆蛋白；如纤维蛋白原等； 2)已溶解红细胞的基质；他们有竞争抗体的作用。 3)可溶性的抑制物质，如A、B、H、Lewis 等血型物质； 4)抗凝剂；他们有抗补体作用。 ★红细胞悬液的常用浓度 压积红细胞1滴加8滴生理盐水所配成的悬液约为10%，按此比例配制其他所需浓度的红细胞悬液。 2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价。 5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血试验、及抗球蛋白试验等大多数血型血清学试验。 10%的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲和力试验。 ★（三）标本的保存 1．血清标本 没有稀释过的血清如加有防腐剂可在4℃冰箱保存数月；在-20℃以下可保存数年而其抗体活性基本不变。 用白蛋白或无抗体活性的AB型血清作稀释剂稀释血清后保存，效果和上述相同 。 用生理盐水稀释过的血清只限当天使用，不能保存。 用大分子物质做稀释介质，其对抗体活性不起保护作用。  2．红细胞标本 一般试验用的在4℃冰箱保存下的凝血标本要在5天内使用，以不溶血为准。 ACD保存液或其它特制的保存液可保存红细胞3周。 盐水配制的红细胞悬液只能当天使用，不宜保存。 应注意的问题： 用作交叉配血的供血者、病人标本（血清、细胞）要放4℃冰箱保存1周，以便在出现输血反应时可备查。 各种保存的红细胞在使用前都要用盐水洗一次以上。 盐水介质凝集试验 原 理 盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗体分子上的抗原结合部位结合，交叉连结形成肉眼可见的凝集块。 ★用 途： 盐水介质凝集试验用于IgM抗体的检出、鉴定、盐水配血试验。 盐水抗体鉴定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系统的抗原。 例外情况： 在盐水介质中，凝集是IgM抗体的行为。ABO血型系统中的A、B抗原位点多，当IgG抗A、抗B的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应。 盐水介质凝集试验 (一)方法 常用的方法有平板法和试管法。 盐水介质凝集试验（二）、立即离心法： 用 途： 盐水法鉴定血型和交叉配血时，多采用立即离心(immediate spin)法。正确的操作是红细胞悬液加到血清中后立即离心并观察结果。 （三）、试验结果的判读和记录 判读结果前应预先设计好记录册，在记录册上标记好细胞样本和血清样本的位置。一定要一边观察，一边记录结果，不能事后记录。常用的记录符号及所示的凝集强度如下: （三）、试验结果的判读和记录 4+：一个大凝集块，背景透明，无游离细胞。 3+：:数个大凝集块，背景透明，无游离细胞。 2+：许多小凝集块，肉眼可见，大小均匀，背景基本透明，有游离细胞。 1+：很小的凝集块，肉眼可见，背景不 透明，游离细胞较多，常要用显微镜观察。 W+：:微小凝集块，肉眼很难看清，背景浑浊，要用显微镜观察。 O：无凝集，无溶血，全部是游离细胞，要用显微镜观察。 PH：部分溶血。 H：完全溶血。 （四）缗钱状凝集的处理 概 念： 在盐水介质的凝集试验中，常见到缗钱状凝集现象，也称串钱状凝集，这是一种假凝集，由红细胞形成的这种假凝集就象许多硬钱币堆积在一起。 ★缗钱状凝集的特点： 1 在显微镜下红细胞膜完整； 2 细胞间界限清晰地成缗钱串聚集； 3 缗钱状假凝集反应不不受温度影响； 4 室温