原核生物基因的表达及其调控.ppt

原核生物基因的表达及其调控 第一节 原核生物基因的转录和翻译 原核生物的DNA： 单个裸露的DNA 不编码占5% 转录和翻译同一时间，地点进行 基因调控主要在三个水平上进行: ①. DNA水平 ②. 转录水平(主) ③. 翻译水平 （一）RNA聚合酶(RNA polymerase)： 在启动子与终止子之间是一个转录单位，通常将mRNA开始的一个核苷酸定为o点(即+1)．由此向右常称为下游(downstream)，其核苷酸依次编为正序号；起始点左例称为上游(upstream)．其核苷酸则依次以负号表示．紧接起始点左侧的核苷酸为-1。 离体实验表明：全酶所转录的RNA和细胞内所转录出的RNA，其起始点相同，序列相同，若仅用核心酶进行转录，则模板链和起始点的选择都有很大的随意性，而且往往同一段DNA的两条链都被转录。 由此可见：σ亚基对识别DNA链上的转录信号是不可缺少的，它是核心酶和启动子之间的桥梁。 σ因子的取代在细胞发育和对环境应答的反应中起主导作用。如在枯草杆菌中就有不同相对分子质量的σ因子 Figure 9.6 RNA polymerase moves like an inchworm during elongation, when it compresses from the back end and release from the front end. RNA聚合酶体积很大，横跨近60个碱基，而解旋的DNA区域可能不到17个碱基。当聚合酶按5′→3′方向延伸RNA链时，解旋的DNA区域也随之移动。靠近3′端的DNA不断解旋。同时在5′端重新形成DNA双链，不断将RNA-DNA杂合链中的RNA链挤出。 （二）启动子 (promoter)： 转录的起始是基因表达的关键阶段，启动子就是连接在基因3’端上游的DNA序列，其长度从100 bp到200 bp不等，是转录起始时RNA聚合酶识别、结合的特定部位，但其本身并不被转录。 回文顺序 (Palindromic sequence) 5‘ GTGAGCTCAC 3’ 3’ CACTCGAGTG 5’ 所有原核生物的终止子共同的序列特征 在转录终止点之前有一段回文结构，因而所产生的mRNA可形成茎环状的发夹结构，它可使RNA聚合酶的移动停止或减缓。 第二节 大肠杆菌乳糖操纵子的正负调控 一、操纵子与操纵子模型 操纵子学说/操纵子模型： F.Jacob J.Mond（1960）E.coli lac operon( 1965诺贝尔医学生理学奖) 操纵子：核酸分子上调控基因转录活性的基本单元，由结构基因、操纵基因（O）和启动基因（P）组成。 阻遏物与辅阻遏物 阻遏物（repressor）：由调节基因产生的一种变构蛋白，当它与操纵基因结合时，能够抑制转录的进行。 辅阻遏物(corepressor)：能够与失活的阻遏蛋白结合，并恢复阻遏蛋白与操纵基因结合能力的物质。 诱导调控与非诱导调控 如：大肠杆菌乳糖代谢的调控需要三种酶参加: ①. β-半乳糖酶：将乳糖分解成半乳糖和葡萄糖 ②. 渗透酶：增加糖的渗透，易于摄取乳糖和半乳糖 ③. 转乙酰酶：β-半乳糖转变成乙酰半乳糖 大量乳糖时：大肠杆菌三种酶的数量急剧增加，几分钟即可达到千倍以上，这三种酶能够成比例地增加. 乳糖消耗完：这三种酶的合成也即同时停止. 大肠杆菌乳糖操纵子的负调控(可诱导) 葡萄糖抑制操纵子的原理： 葡萄糖效应—培养基中有葡萄糖存在时，即使有乳糖存在，不诱导靶基因表达。这样的操纵子称葡萄糖敏感操纵子。这种效应由一种正控制机制决定。 　葡萄糖 腺苷酸环化酶活性降低 ATP无法转变成cAMP 不能形成CAP-cAMP复合蛋白 RNA酶无法结合在DNA上 结构基因不表达。 阿拉伯糖操纵子的双向控制 色氨酸操纵子的转录调控 1．色氨酸操纵子模型：　　由雅各布（Jacob F.）和莫诺（Monod J.）提出，具有合成代谢途径典型的操纵子模型。　　操纵子：包括色氨酸合成有关的5种酶的结构基因；　　大量色氨酸时：大肠杆菌5种酶的转录同时受到抑制；　　色氨酸不足时：这５种酶的基因开始转转录；　　色氨酸：作为阻遏物而不是诱导物参与调控结构基因的转录。　　∴　trp操纵子是一个典型的可阻遏操纵元模型(repressible operon)。 比较大肠杆菌乳糖操纵子负调控和色氨酸操纵子负调控 色氨酸操纵子模型结构：　　5种结构基因：trpE、D、C、B、A；　　调