2017-18学年高中生物专题2微生物的培养与应用课题3分解纤维素的微生物的分离练习.docxVIP

课题3分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶是复合酶，包括C1 1．纤维素酶是复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶等组分。 2．纤维素酶的作用：纤维素eq \o(――――→,\s\up7(C1酶和Cx酶),\s\do5(　　))纤维二糖eq \o(――――→,\s\up7(葡萄糖苷酶),\s\do5(　　))葡萄糖。 3．刚果红与纤维素形成红色复合物。当纤维素被分解后，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。 4．分离分解纤维素的微生物的实验流程：土壤取样―→选择培养―→梯度稀释―→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上―→挑选产生透明圈的菌落。 5．分离后，为确定得到的是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验。 纤维素酶及纤维素分解菌的筛选 [自读教材·夯基础] 1．纤维素 (1)基本组成单位：葡萄糖。 (2)含量：是地球上最丰富的多糖类物质。 (3)分布：棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素。 2．纤维素酶 (1)组成：纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用： 纤维素eq \o(――→,\s\up7(C1酶和Cx酶),\s\do5(　))纤维二糖eq \o(――→,\s\up7(葡萄糖苷酶),\s\do5(　))葡萄糖 (3)实验验证： 试管 滤纸条 缓冲液pH＝4.8 纤维素酶(70～80 U/mL) 条件 结果 1 1 cm×6 cm 10 mL 1_mL 将两支试管固定在50 mL的锥形瓶中，在摇床上以140 r/min的转速振荡反应1 h 完全 分解 2 1 cm× 6 cm 11 mL 基本 无变化 3.纤维素分解菌的筛选 (1)方法：刚果红染色法，常用的有两种。一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；另一种是在倒平板时就加入刚果红。 (2)原理： [跟随名师·解疑难] 纤维素分解菌的筛选 (1)筛选原理： 刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖反应。当纤维素被纤维素酶分解后，该复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。 (2)筛选方法： 方法一 方法二 操作 先培养微生物，再加入刚果红 倒平板时加入刚果红 优点 显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作简便，不存在菌落混杂的问题 缺点 操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂 ①由于在纤维素粉、琼脂和土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现透明圈较为模糊的假阳性反应 ②有些微生物具有降解色素的能力，长时间培养会降解刚果红而形成明显的透明圈 实验设计和课题延伸 [自读教材·夯基础] 1．实验设计流程 2．课题延伸——纤维素分解菌的鉴定 (1)为确定得到的透明圈中的菌落是纤维素分解菌，需要进行发酵产纤维素酶的实验。纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。 (2)纤维素酶的测定方法，一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。 1．阅读教材P29旁栏中的纤维素分解菌选择培养基的成分回答下列问题。 (1)旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 提示：是液体培养基，因为配方中无凝固剂。 (2)这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，是如何进行选择的？ 提示：有选择作用。本配方中的唯一碳源是纤维素粉，所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖，而不能分解纤维素的微生物被抑制。 (3)你能否设计一个对照实验，说明选择培养的作用？ 提示：用接种了的牛肉膏蛋白胨培养基进行对照，若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数大于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基具有筛选作用。 2．在实验过程中，为什么要进行梯度稀释？ 提示：通过梯度稀释使聚集在一起的微生物分散成单个细菌，在培养基表面形成单个的菌落。 3．分离分解纤维素的微生物实验，只是分离纯化的第一步，为确保得到的是纤维素分解菌，还需要做什么工作？ 提示：还需要进行发酵产纤维素酶的实验。 [跟随名师·解疑难] 1．纤维素分解菌的筛选过程中所用两种培养基的成分和作用 (1)纤维素分解菌的选择培养基： 组分 含量 提供的主要营养物质 纤维素粉 5 g 碳源、能源 NaNO3 1 g 无机盐 Na2HPO4·7H2O 1.2 g KH2PO4 0.9 g MgSO4·7H2O 0.5 g KCl 0.5 g 酵母膏 0.5 g 特殊营养成分、碳源、氮源 水解酪素 0.5 g 氮源、特殊营养成分 上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1 000 mL 　　(2)鉴别纤维素分解菌的培养基： 组分 含量 提供的主要营养物质 CMC-Na 5～10 g 碳源 酵母膏 1 g 碳源、氮源、特殊营养成分 KH2PO4 0.25 g 无机盐 琼脂