罗非鱼组织蛋白酶d和基质金属蛋白酶2基因的克隆鉴定及其功能分析动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得 的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体， 均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学 校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论 文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存 论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文 收录到《中国学位论文全文数据库》，并向社会公众提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：塑毯堡 导师签名：量二蠡 万方数据 符号说明 符号说明 1㈣戮 AMP：Ampicillin,氨苄青霉素 CDS：coding sequence，编码序列 EDTA：ethylene diamine tetraacetic acid,乙二胺四乙酸 GRAVY：Grand average ofhydropathicity,总平均疏水指数 MALT：Mucosa-associated lymphoid tissue，粘膜相关淋巴组织 MAS：marker-assisted selection,多肽结合位点 MMLV：Moloney murine leukemia virus，莫洛尼氏鼠白血病病毒 MMP2：matrix metalloproteinase 2，基质金属蛋白酶2 OD：optieal density,光密度 PI：isoelectric point,等电点 qRT-PCR：real time quantitative polymerase chain reaction，实时荧光定量PCR RACE：rapid amplification of cDNA ends，快速克隆cDNA末端技术 TAE：Tris．Acetic acid-EDTA，三羟基甲基氨基甲烷．乙酸．乙二胺四乙酸 TBE：Tris—Boric acid—EDTA，三羟基甲基氨基甲烷．硼酸．乙二胺四乙酸 UTR：untranslated region，非编码区 rpm：revolutions per minute，每分钟转数 mL：millititer,毫升 uL：microliter,微升 g：gram，克 万方数据 目 目 录 中文摘要 ．I Abstract ． Ill 1弓l言 。1 1．1罗非鱼及其养殖现状 ．．1 1．2鱼类的免疫系统 ．2 1．2．1免疫器官和组织 2 1．2．2免疫细胞 3 1．2．3体液免疫因子 4 1．3组织蛋白酶D(cathepsinD)基因 4 1．3．1组织蛋白酶D的合成 ．．4 1．3．2 cathepsin D基因的功能 5 1．3．3 cathepsin D基因在鱼类的免疫学作用 6 1．4基质金属蛋白酶2(matrix metaUoproteinase 2)基因 7 1．4．1基质金属蛋白酶的概述 7 1．4．2基质金属蛋白酶的分类 7 1．4．3金属蛋白酶2的结构 9 1．4．4基质金属蛋白酶2前体的激活 ．10 1．4．5基质金属蛋白酶2的功能 ．1l 1．4．6基质金属蛋白酶2在水产上的研究 ．12 1．5本研究的目的与意义 12 2材料与方法 ．．． 14 2．1实验材料 14 2．1．1试验动物 ．14 2．1．2嗜水气单胞菌 14 2．1．3主要仪器设备 ．14 2．1．4主要试剂 ．．15 2．1．5常用溶液配制 。15 万方数据 2． 2．2试验方法 16 2．2．1引物合成 16 2．2．2总RNA的提取(TRIZOL法)与质量检测 一17 2．2．3反转录合成eDNA与检测 1 8 2．2．4罗非鱼基因组DNA的提取与检测 ．．18 2．2．5 RACE扩增目的基因全长eDNA序列 ．20 2．2．6罗非鱼cathepsin D基因组序列扩增 21 2．2．7 PCR产物片段回收 21 2．2．8 PCR产物与载体的连接 22 2．2．9大肠杆菌的转化及测序 ．． 22 2．2．10生物信息学分析 一23 2．2．11细菌攻毒罗非鱼试验 23 2．2．12荧光定量PCR ．23 3结果与分析 ．．． 24 3．1实时荧光定量PCR ．24 3．2罗非鱼eathepsin D基因实验结果 26 3．2．1罗非鱼eathepsin D基因的克隆与氨基酸序列分析 26 3．2．2罗非鱼eathepsin D同源性分析