姜黄素与其代谢产物的体内药动学及对p糖蛋白功能和表达的影响药剂学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 姜黄素与其代谢产物的体内药动学及对 P．糖蛋白功能和表达的影响 摘要 一、 目的 采用血浆药理学与现代分析技术相结合的方法，研究姜黄素与其 代谢产物四氢姜黄素的体内药动学及对Caeo．2细胞上P．糖蛋白功能 和表达的影响，研究其逆转肿瘤耐药及药物相互作用的依据。 二、方法 (一)姜黄素单剂量药动学研究方法 1．给药方法 采用随机开放试验设计，12名健康志愿受试者单剂量口服姜黄 素胶囊4粒(200mg)。 2．生物样本采集方法 分别于服药前及服药后0，O．25，O．5，1，1．5，2，3，4，6，8， 12，24和36h由肘静脉取血5mL置肝素化离心管中，分离出血浆， 置．800C冰箱中保存待测。 3．测定方法 采用HPLC．ESI．MS／MS法测定血浆中姜黄素及其代谢产物四氢 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 姜黄素的浓度。 (二)姜黄素、四氢姜黄素对P．糖蛋白的作用研究方法 1．细胞培养以及形态学验证 培养Caco．2细胞、脐静脉内皮细胞(ECV304)，用于研究姜黄素 和四氢姜黄素对P．糖蛋白功能和表达的影响。Caco．2细胞和ECV304 细胞均采用DMEM高糖培养基进行常规培养；细胞荧光免疫法进行细 胞膜上P．糖蛋白表达验证。 2．细胞毒性试验 采用苯基溴化四氮唑蓝法(MTT)，确定姜黄素和四氢姜黄素的 体外最大非细胞毒性剂量，保证试验过程中细胞的活性，并为姜黄素、 四氢姜黄素对P．糖蛋白功能和表达的作用研究提供与细胞作用的最 大浓度。 3．姜黄素、四氢姜黄素和含药血浆对P．糖蛋白功能的影响 以ECV304细胞作阴性对照细胞，环孢素A作为P．糖蛋白功能 抑制的阳性对照，使用流式细胞术分析姜黄素、四氢姜黄素及含药血 浆对P．糖蛋白底物一罗丹明．123(Rh．123)在Caco．2细胞中外排的 影响，以此反应P．糖蛋白功能的变化。 4．从蛋白质水平研究姜黄素、四氢姜黄素对P．糖蛋白表达的影响 环孢素A作为P．糖蛋白表达上调的阳性对照，不加药处理的 Caco．2细胞作为阴性对照，采用流式细胞术分析姜黄素、四氢姜黄素 Ⅱ 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 对Caco-2细胞上P．糖蛋白表达的影响。 5．从mRNA水平研究姜黄素、四氢姜黄素对MDRl mRNA表达的 影响 环孢素A作为MDRl基因mRNA上调的阳性对照，不加药处理 的Caco．2细胞作为阴性对照，采用RT-PCR技术分析姜黄素、四氢 姜黄素对Caeo-2细胞MDRl基因mRNA水平表达的影响。 三、结果 (一)姜黄素单剂量药动学研究结果 1．姜黄素及四氢姜黄素的测定 姜黄素和四氢姜黄素分别在0．50～37．50ng‘mL以和 1．67～100．00ng．mL1浓度范围内线性关系良好，最低检测浓度分别为 O．125ng·mL‘1和0．500ng·mL～。萃取回收率均大于71．46％，方法回收 率为94．30％～104．43％，日内、目问RSD均小于11．92％，高、中、 低三种浓度的质控样品稳定性良好，浓度变异均小于15．00％。 2．姜黄素和四氢姜黄素的药动学参数 12名健康志愿者单剂量口服姜黄素后，姜黄素和四氢姜黄素的 各项药动学参数如下：t一为2．42士1．93h和2．54士2．03h，tl／2为 10．67+2．43h和12．66士3．63h，Cm瓤为1 1．38士4．90ng。mL。1和 37．10圭21．98ng·mL1， AUCo．36为 128．13j：49．07ng‘h‘mL’1和 309．76a：123．93ng·h·mL～，AUC帅为138．83+48．21ng。h‘mL。1和 m 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 343．65+1 17．39ng·h·mL～， CL／F 为 386．69士88．02mL·h．1 和 1 58．27+42．37mL·h-1， Ⅵ 为 6080．38+2080．80mL 和 3063．96+1480．17mL。 (二)姜黄素、四氢姜黄素对P．糖蛋白作用的研究结果 1．细胞培养以及形态学验证 Caco．2和ECV304细胞形态正常；Caco．2细胞高表达P．糖蛋白， 可用于研究姜黄素和四氢姜黄素对P．糖蛋白功能和表达的影响； ECV304细胞基本不表达P．糖蛋白，适合作为阴性对照细胞。 2．细胞毒性试验 姜黄素和四氢姜黄素分别在小于等于1．01xrnol·L4和5．09mol·Ld 时，与Caco．2细胞培养72小时后，细胞的存活率大于90％。因此， 选取姜黄素和四氢姜黄素的最大浓度分别为1．01xrnol·L’1和 5．09mol·L一，进行其对Caco．2细胞上P．糖蛋白功能和表达影响的研 究。 3．姜黄素、四氢姜黄