eb病毒lmp1通过p53调控survivin的分子机制研究肿瘤病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 在对G1／S期的调控中也具有重要的生物学意义。Survivin抑制细胞 凋亡的机制是非常复杂的，它可以通过调节基因的表达，通过蛋白质 之间的相互作用以及线粒体的动力学等多种方式实现。 我们的工作证实LMPl能够通过活化NF．r．B和AP．1介导抗凋亡 蛋白survivin的异常激活。LMPl表达介导survivin核移位，促进细 胞Rb磷酸化增加，导致S期演进，促进细胞周期行进，从而促进细 胞增殖；LMPl能够同时促进survivin和CDK4的表达以及二者移位 于核，并且能够介导两者的结合，这对于G1／S期的演进具有重要作 用。LMPl通过survivin介导细胞凋亡的抑制。Survivin反义核酸可 抑制survivin表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。这些研究结果为 我们进一步探讨EBV-LMPl介导survivin促进细胞增殖和抑制细胞凋 亡的分子机制提供了有意义的实验依据。 研究发现，许多肿瘤中都存在有survivin的过度表达和野生型p53 的缺失或突变。p53基因的突变可能通过细胞内一条或多条信号通路 刺激survivin的表达。野生型p53(wt-p53)可以在转录水平抑制survivin 表达。在survivin启动子上有p53结合位点。p53可以直接结合到 survivin的启动子上，还可通过与其他蛋白，如E2F，sin3和HDAC 等形成复合物结合到survivin启动子上从而抑制survivin的表达。p53 还可以直接结合到cdc2／cyclinBl的催化亚基上，通过抑制 cdc2／cyclinBl激酶的活性，使细胞内survivin的磷酸化水平下调。同 时，survivin也可通过caspase／Mdm2以及AuroraB对p53在蛋白水平 上进行调控。 p53基因作为重要的抑癌基因，人类肿瘤中约50％以上与p53基 因变化有关。p53是一种核内磷酸化蛋白，是细胞生长周期中负调节 因子，与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化、细胞凋亡等重要 的生物学功能有关。但与其他肿瘤不同的是，鼻咽癌中p53基因的突 变频率很低(10％)，且出现了p53蛋白积聚的现象。许多研究表明 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 p53在鼻咽癌的发生发展过程中是具有活性的。 我们的前期研究发现，永生化鼻咽上皮NP69细胞模型中存在大 量游离的野生型的p53，并且其中p53是具有活性的，LMPl能在转 录水平和蛋白水平调节p53的表达。我们发现LMPl可通过MAPK (Mitosis active protein kinase)信号转导通路调节p53多个位点的磷 酸化，并促进p53的转录活性、反式激活能力以及降低p53与MDM2 的结合能力，从而促进LMPl对p53活性和稳定性的调节。同时，我 们在其他鼻咽癌细胞模型中的研究工作也证实LMPl可通过活化核 转录因子NF．r．B和AP．1上调p53蛋白的表达及其反式激活活性，降 低cdc2／cyclinBl复合物的激酶活性，诱导细胞阻滞于G2／M期，但 未有凋亡的发生。 因此，我们假设，在鼻咽癌细胞中，LMPl有可能通过调控p53 的转录活性，进而调控survivin。我们在p53外显子8突变的的鼻咽 癌细胞系(CNEl，CNEl．LMPl)和含野生型p53的永生化鼻咽细胞 系(NP69，NP69．pLNSX， NP69．LMP 1)中，通过Western blotting 技术结合阻断策略检测细胞中p53基因沉默前后survivin的蛋白水平 变化。结果发现，无论是在p53外显子8突变的鼻咽癌细胞模型还是 在含野生型p53的鼻咽细胞模型中，LMPl均可上调p53和survivin 的蛋白水平及其活性；在LMPl调控下，转染p53siRNA质粒后， survivin的蛋白水平也呈明显下调。这些结果证实了我们的假设，即 LMPl可以通过转录因子p53上调survivin。结合上述研究进展及我 们的工作基础，我们认为LMPl通过p53上调survivin与p53外显子 8突变无关。 进一步，我们对LMPl通过转录因子p53调控survivin的分子机 制进行探讨。转录水平上，我