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复旦大学博士毕业论文恶性黑色素瘤中MAPK信号通路及相关癌基因的研究 复旦大学博士毕业论文 恶性黑色素瘤中MAPK信号通路及相关癌基因的研究 中文摘要 第一部分 鼻腔恶性黑色素瘤中NRAS和BRAF基因突变研究 背景研究表明在皮肤恶性黑色素瘤中癌基因NRAS的突变率为9-15％，BRAF的突变 率为60—66％，而在视网膜恶性黑色素瘤中却没有发现NRAS和BRAF基因的突变。在 鼻腔恶性黑色素瘤中NRAS和BRAF基因的突变率未见报道。本部分实验旨在研究鼻 腔恶性黑色素瘤标本中NRAS和BRAF的突变。 方法：提取12例鼻腔恶性黑色素瘤新鲜组织中的DNA，经PCR扩增后，进行基因序 列分析并与正常NRAS和BRAF基因序列比较。 结果：12例标本中，未发现NRAS基因突变，8例标本中发现1例BRAF基因突变。 结论：鼻腔恶性黑色素瘤的NRAS和BRAF突变率远低于皮肤恶性黑色素瘤。 关键词：癌基因恶性黑色素瘤NRAS BRAF突变 中图分类号：R739．65 复旦大学博士毕业论文第二部分 复旦大学博士毕业论文 第二部分 鼻腔恶性黑色素瘤中持续活化的ERK酶检测 背景研究表明Ras—Raf—MAPKK—ERK信号通路的持续活化在皮肤恶性黑色素瘤的发 生、发展中起着重要作用，而这一信号通路的持续活化与NRAS和BRAF基因的高突 变率有关。在前面的研究中，我们在鼻腔恶性黑色素瘤中未发现NRAS基因突变，BRAF 基因的突变率也很低，那么在鼻腔恶性黑色素瘤中是否存在ERK的持续活化呢?本 部分实验旨在研究鼻腔恶性黑色素瘤中持续活化的ERK。 方法：用Western蛋白印迹法检测12例鼻腔恶性黑色素瘤标本中活化的ERK。 结果：12例鼻腔恶性黑色素瘤标本中，有8例表达活化的ERK，占66％。 结论：：ERK的持续活化是鼻腔恶性黑色素瘤的发病机制之一。 关键词：恶性黑色素瘤 ERK 中图分类号：R739．65 复旦大学博士毕业论文第三部分 复旦大学博士毕业论文 第三部分 ERK信号通路阻断后恶性黑色素瘤细胞周期的变化 背景：研究表明ERK的持续活化在恶性黑色素瘤的发生、发展中起着重要作用，ERK 的激活对于Ras诱导的许多细胞反应、许多转录因子(Elkl、cEtsl、c—Ets2)的 激活以及许多激酶(如p90rskl、MNKl、MNK2)的激活是至关重要的。在恶性黑色 素瘤中激活的ERK究竟参与了哪些细胞反应还有待进一步研究。本部分实验旨在研 究ERK对细胞周期的影响及其机制。 方法：选用持续活化的ERK细胞株A-375，用MEK抑制剂PD98059阻断ERK信号通 路，观察细胞生长曲线并用MTT法观察细胞增殖，用流式细胞仪检测细胞周期，用 Western蛋白印迹法检测活化的ERK和细胞周期蛋白Cycl ine D1的表达。 结果：ERK信号通路阻断后，G㈦期细胞所占比例明显增加(p0．01)，S期细胞所占 比例明显降低(pO．01)，同时细胞周期蛋白Cyclin D1无表达。 结论：ERK信号通路阻断后，细胞阻滞于G㈨期。其机制与细胞周期蛋白Cyclin D1 的合成抑制有关。 关键词恶性黑色素瘤ERK 细胞周期细胞周期素D1 中图分类号：R739．65 复旦大学博士毕业论文第四部分 复旦大学博士毕业论文 第四部分 ERK信号通路在恶性黑色素瘤细胞中的抗凋亡作用 背景：研究表明ERK的持续活化在恶性黑色素瘤的发生、发展中起着重要作用，同 时有研究表明ERK信号转导通路在急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemiaAML) 中起着一定的抗凋亡作用。而ERK信号通路是否在恶性黑色素瘤细胞中也有抗凋亡 作用尚无报道。本部分实验旨在探索活化的ERK信号通路在恶性黑色素瘤细胞中的 抗凋亡作用。 方法t用恶性黑色素瘤细胞A-375分别在含血清、含血清加PD98059、无血清、无 血清加PD98059培液中培养，用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，并用荧光显微镜 和激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞，比较各组细胞问凋亡差异。 结果：ERK通路激活时，无血清组与含血清组细胞凋亡无显著性差异，ERK通路阻断 后，含血清组与无血清组细胞凋亡有显著性差异。 结论：ERK信号转导通路在恶性黑色素瘤细胞中有一定的抗凋亡作用。 关键词：黑色素瘤ERK凋亡 中图分类号：R739．65 复旦大学博士毕业论文AB 复旦大学博士毕业论文 AB STRACT The role of MAPK signal transduction and the mutations of N RAS and BRAF in melanomas PART I The mutations of NRAS and BRAF in nasal melanomas Background